HaloTag® Imaging tools
HaloTag® AcidiFluor™ ORANGE Ligand
HaloTag® AcidiFluor™ ORANGE Ligand は、酸性条件（pH 6以下）で蛍光が劇的に上昇する、S/N 比が高い蛍光プローブです。細胞膜非透過性のHaloTag® AcidiFluor™ ORANGE Ligand は、細胞膜表面のHaloTag® タンパク質への特異的な標識を行います。蛍光色はオレンジで、532 nm、514 nm で励起が可能です。DAPI、Hoechst などの青色蛍光やGFP、Fluoresceinなどの緑色蛍光、さらに近赤外蛍光の色素と共染色ができます。この蛍光プローブは褪色に非常に強く、細胞膜受容体等のエキソサイトーシス・エンドサイトーシスに対する長期タイムラプスイメージングに最適です。
- pH応答性蛍光色素AcidiFluor™ ORANGEをHaloTag® リガンド化
- 高いS/N比 により、高感度のイメージングが可能
- 褪色しにくく、長時間のトラッキングが可能
保存条件：-20℃
製品プロトコル：HaloTag® AcidiFluor™ ORANGE Ligand
アプリケーション①
小胞のエキソサイトーシス/エンドサイトーシスを可視化
HaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligandを用いた小胞のタイムラプスイメージング
HaloTag® を発現させた小胞結合膜タンパク質であるVAMP2に対してHaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligandで標識を行い、タイムラプスイメージングを行った結果、小胞が細胞膜との融合・乖離を繰り返すとともに蛍光の明滅が観測された。褪色に強く、高いS/N比でpH応答を示すHaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligandにより、小胞のエキソ・エンドサイトーシスの可視化が実現できた（参考文献1）。
アプリケーション②
Cellular phenotype-based HTSによる生理活性小分子の探索
図3. HER2受容体の細胞内移行を促進させる有機小分子のスクリーニング
図4.スクリーニングの結果ヒットした有機小分子の化学構造
384ウェルプレートに播種したHaloTag-HER2発現細胞に対しHaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligand で標識した後、HER2受容体の細胞内移行を促進させる有機小分子のスクリーニングを行った（図3）。約16万の化合物ライブラリーをスクリーニングした結果、Compound a-cの３つの化合物がヒットした（図4）。解析においては、有意とされる0.5を超える高いZ’ファクター（0.66）と高いS/N比(44.6)を実現でき、HaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligandによる細胞表現型を指標としたHTSの実用性が示された。
構造
HaloTag® 融合タンパク質にpH応答性蛍光色素AcidiFluor™ ORANGEを特異的に標識できます。
HaloTag AcidiFluor™ ORANGE Ligandの構造
製品案内
機能性 蛍光リガンド
HaloTag® AcidiFluor Orange(pH センサー） [プロトコル]
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | 製品情報 |
|---|---|---|---|
| HaloTag® AcidiFluor Orange(pH センサー） [プロトコル] | 520 | 565 | 五稜化薬HP |
蛍光リガンド（標準プロトコル用）
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® Coumarin Ligand | 362 | 450 | 15 μl | G8582 |
| 30 μl | G8581 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® Oregon Green® Ligand | 492 | 520 | 15 μl | G2802 |
| 30 μl | G2801 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® diAcFAM Ligand | 492 | 521 | 15 μl | G8273 |
| 30 μl | G8272 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® TMR Ligand | 552 | 578 | 15 μl | G8252 |
| 30 μl | G8251 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | 製品情報 |
|---|---|---|---|
| HaloTag® SaraFluor 650T ligand （旧製品名：HaloTag® STELLA Fluor™ 650 Ligand） [プロトコル] ［MSDS］ |
646 | 660 | 五稜化薬HP |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® Alexa Fluor® 488 Ligand（細胞膜非透過性） | 499 | 518 | 15 μl | G1002 |
| 30 μl | G1001 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® Alexa Fluor® 660 Ligand（細胞膜非透過性） | 654 | 690 | 15 μl | G8472 |
| 30 μl | G8471 |
蛍光リガンド（”No-wash” プロトコル用）
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® R110Direct™ Ligand | 498 | 528 | 30 μl | G3221 |
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| 製品名 | 励起波長(Ex) | 蛍光波長(Em) | サイズ | カタログ番号 |
|---|---|---|---|---|
| HaloTag® TMRDirect™ Ligand | 552 | 578 | 30 μl | G2991 |
※蛍光リガンドは通常1000 倍に希釈して使用します。
（原液30 μl は300ウェル分に相当：1Xリガンド希釈液100 μl/ウェル 使用時[8ウェルチャンバーなど]）
参考文献
- Asanuma D, Takaoka Y, Namiki S, Takikawa K, Kamiya M, Nagano T, Urano Y & Hirose K. Acidic-pH-Activatable Fluorescence Probes for Visualizing Exocytosis Dynamics. Angew Chem Int Ed 53 (24) 6085–6089, 2014
- Masayuki Isa, Daisuke Asanuma, Shigeyuki Namiki, Kazuo Kumagai, Hirotatsu Kojima, Takayoshi Okabe, Tetsuo Nagano, and Kenzo Hirose “High-throughput screening system to identify small molecules that induce internalization and degradation of HER2.” ACS Chem Biol 2014; 9(10) :2237-2241.