マルチアッセイ
同じサンプルから複数のパラメーターについて情報を入手できるマルチアッセイ（マルチプレックス）はこれからのセルベースアッセイには必須の技術になります。マルチプレックスの目的として大きく2つに分けられます。1）それぞれのパラメーターを独立した実験情報として取得する場合。2）一方の実験情報パラメーターを他方のパラメーターが補正し、先の実験情報の精度を上げるためのに取得する場合（レシオメトリックな値）です。
レシオメトリックな値は、レポーター実験で広く用いられているプロメガのDual-Luciferase® Assay Systemで得られる値が代表的で、トランスフェクション効率や細胞数によるばらつきを抑えた正確な値として実験データに信頼性を与えます。
さらに、プロメガの複数のセルベースアッセイキットを組み合わせることでより多くの情報を獲得することができます。サンプルの一部を特定のアッセイに使用し、残りのマスタープレートで他のアッセイやイメージング分析を行う方法もあります。
| 1st アッセイ | 2nd アッセイ | 分注タイプ* | シグナルの分離技術 |
|---|---|---|---|
|
アポトーシスおよび細胞生存性 (カスパーゼ3/7)(生プロテアーゼ） |
A |
検出法 (蛍光-発光) |
|
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細胞生存性および細胞毒性（生プロテアーゼ）（死プロテアーゼ） |
A |
検出法 (蛍光-発光) |
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細胞生存性および細胞毒性（生プロテアーゼ)（死プロテアーゼ） |
B |
蛍光（400Ex/505Em-485Ex/520Em) |
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細胞毒性およびミトコンドリア毒性 (死プロテアーゼ)(ATP） |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
|
細胞毒性および全細胞数（死プロテアーゼ)（死プロテアーゼ） |
A |
細胞状態（死細胞-細胞溶解） |
|
細胞生存性 (生プロテアーゼ） |
レポーターアッセイ（ホタル-ルシフェラーゼ） ONE-Glo™ Assay 他 |
A |
検出法（蛍光-発光） |
アポトーシス経路（カスパーゼ3/7 or 8 or 9） Caspase-Glo® 3/7, 8 または9 Assay |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
細胞生存性（ATP） |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
グルタチオンアッセイ |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
細胞生存性（NADH） |
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
A |
蛍光（560Ex/590Em-499Ex/521Em) |
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
A |
検出法（蛍光 -発光） |
|
細胞毒性 (死プロテアーゼ） |
アポトーシス経路（カスパーゼ3/7 or 8 or 9） Caspase-Glo® 3/7, 8 または9 Assay |
A |
検出法（蛍光-発光） |
細胞生存性（ATP） |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
レポーターアッセイ（ホタル-ルシフェラーゼ） ONE-Glo™ Assay 他 |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
細胞毒性（ LDH） |
細胞生存性（ATP) |
A or C |
検出法（蛍光-発光） |
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
A |
検出法（蛍光-発光） |
|
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
C |
蛍光（560Ex/590Em-499Ex/521Em) |
|
レポーターアッセイ（ウミシイタケ -ルシフェラーゼ） |
細胞生存性（ATP） |
A |
細胞状態（生細胞-細胞溶解） |
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
A |
細胞状態（生細胞-細胞溶解）検出法（発光-蛍光） |
|
アポトーシス（カスパーゼ3/7） |
A |
細胞状態（生細胞-細胞溶解） |
|
アポトーシス経路（カスパーゼ8 or 9） Caspase-Glo® 8 または9 Assay |
アポトーシス経路（カスパーゼ3/7） |
B |
検出法（発光-蛍光） |
誘導 P450 |
細胞生存性（ATP) |
C |
培地と細胞の分取 |
レポーターアッセイ（ホタル-ルシフェラーゼ） |
C |
培地と細胞の分取 |
|
レポーターアッセイ（ホタル-ルシフェラーゼ）（ウミシイタケ-ルシフェラーゼ） |
A |
基質（ルシフェリン-セレンテラジン） |
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レポーターアッセイ（緑ルシフェラーゼ）（赤ルシフェラーゼ） |
B |
測定波長（Em537-Em613) |
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| 1st / 2nd アッセイ | 3rd アッセイ | 分注タイプ* | シグナルの 分離技術 |
|---|---|---|---|
| 細胞生存性および細胞毒性 （生プロテアーゼ）（死プロテアーゼ） MultiTox-Fluor Assay |
アポトーシス経路（カスパーゼ3/7 or 8 or 9） Caspase-Glo® 3/7,8 または9 Assay |
A |
検出法（蛍光-発光） |
| レポーターアッセイ（ホタル-ルシフェラーゼ） Bright-Glo™ Assayまたは Steady-Glo® Assay、他 |
A |
検出法（蛍光-発光） |
*分注タイプ
A. 同一ウェルに複数のアッセイ試薬を連続して添加。
B. 複数のアッセイ試薬成分を含むマスターミックスを添加。
C. 培養細胞（マスタープレート）から培地の一部を別のプレートに分注し、それぞれアッセイ。
