PureYieldTM Plasmid Maxiprep System

PureYieldTM Plasmid Maxiprep System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A2391, A2392, A2393 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 詳細なプロトコールは、英文マニュアル #TM280 をご覧ください。 Revised 2012/05 Endotoxin Removal Wash イソプロパノール Coulmn Wash 95% エタノール 2 preps system (A2391) 5.5ml 2 preps system (A2391) 30ml 10 preps system (A2392) 24ml 10 preps system (A2392) 137ml 25 preps system (A2393) 57ml 25 preps system (A2393) 350ml プロトコル ※クリアライセートの調製、その後の精製、溶出操作はすべて室温でষってください。 প腸菌クリアライセートの調製 1. 培養液(100-250ml)を 遠ੱ（5,000×g）しপ腸菌を沈殿させ、培地を取り除く。 10 分 2. প腸菌を Cell Resuspension Solution に懸濁する。 12ml 3. Cell Lysis Solution を添加し転倒混和後、 室温で 3 分間インキュベーションする。 12ml 4. Neutralization Solution を添加し転倒混和させる。 12ml 5. 遠ੱ（15,000×g 室温） （または、遠ੱ（7,000×g 室温））し 上清（প腸菌クリアライセート）を取得する。 20 分 (30 分） このステップでの遠ੱはアングルローターを使৷してください。 プラスミドの精製 1. PureYield™ Maxi Binding Column(ஜ౦; 以下 Binding Column)の上に PureYield™ Clearing Column（ஒ౦; 以 下 Clearing Column）を重ね、吸引マニホールドにセットする（写真(A)を参照）。 2. প腸菌クリアライセートの半量 Clearing Column に注ぐ。 3. 吸引を開始する。溶液が、Clearing Column および Binding Column を完全に通過するまで吸引を続ける。 4. 残りのライセートも注ぎ、吸引する。 5. 溶液が、Clearing Column および Binding Column を完全に通過するまで吸引を続ける。 4. コックを閉めたのち、ゆっくりと Clearing Column を取り除く。 ＊Binding Column 内のメンブレンが、底એから外れたら滅菌したチップ（ピペットを接続する側）で元の位置に押し 込んでください。 洗浄 5. 5ml の Endotoxin Removal Wash（イソプロパノール添加済）を Binding Column に加えたのち、コックを開け て吸引を開始する。 溶液が Binding Column を完全に通過するまで続けたのち、コックを閉める。 6. 20ml の Column Wash Solution（エタノール添加済）を Binding Column に加え、コックを開けて吸引を開始す る。 7. 溶液が Binding Column を完全に通過したのち、さらに空の状態で、30~60 秒間吸引し続け、メンブレン上に残っ ている試薬を完全に取り除く。 終了後、吸引を停ૃする。 注意： 本製品は、吸引法で利用していただくキットです。（アングルローターでの DNA 溶出はできません。） ご使用前に、Endotoxin Removal Wash には、イソプロパノール、Column Wash には、エタノールを所定の量（下表）を添加してください。 添加後は、しっかりと蓋を閉めアルコール成分が揮発しないようにご注意ください。 PureYieldTM Plasmid Maxiprep System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A2391, A2392, A2393 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 詳細なプロトコールは、英文マニュアル #TM280 をご覧ください。 Revised 2012/05 Eluator™を৷いた溶出 8. Eluator™ Vacuum Elution Device の base unit に、滅菌した 1.5ml チューブをセットしチューブキャップをセット する（下の写真(B)を参照）。 9. Vac-Man® Manifold から、Binding Column を取り外し、チップの先の残液をペーパータオル等で拭き取る。Binding Column を、Eluator™ Vacuum Elution Device にセットする（写真(C)を参照）。 10. 1ml の Nuclease-Free Water を Binding Column 内のメンブレンにしみ込ませるように加え、1 分間静置させた のち、吸引を 1 分間ষう*1。 11. 吸引を停ૃし、溶出したプラスミドを含む 1.5ml チューブを回収する。 スイングローターを৷いた溶出 * （アングルローターは使৷できません） 8. ステップ 7 の後に、Vac-Man® Manifold から、Binding Column を取り外し、チップの先の残液をペーパータオル 等で拭き取る。 9. 新しい 50ml の遠ੱチューブに Binding Column をセットし、1.5ml の Nuclease-Free Water を Binding Column 内のメンブレンにしみ込ませるように加え、1 分間静置させる*1。 10. スイングローターを使って室温で 5 分間遠ੱする（2,000×g）。50ml のチューブに得られた DNA は、1.5ml の チューブ等に移して保管する。 ＊1： শ鎖（10kb 以上）のプラスミドを溶出させる場合、あらかじめ 65℃に加温した Nuclease-Free Water を৷い ることで メンブレンから核酸の解離を促進することができます。 PureYieldTM Plasmid Maxiprep System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A2391, A2392, A2393 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 詳細なプロトコールは、英文マニュアル #TM280 をご覧ください。 Revised 2012/05 図は、遠ੱ法で溶出した場合ですが、Eluator™ を利৷する場合、৵容量でも効率よく溶出可能です。