Wizard® SV 96 PCR Clean-Up System

Revised 6/02 Part #9FB071J TECHNICAL INFORMATION: www.promega.co.jp • Tel 03-3669-7980 • Fax 03-3669-7982 Wizard® SV 96 PCR Clean-Up System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A9340, A9341 AND A9342. PCRサンプルとMembrane Binding Solutionを等量ずつ混和し、 Binding Plateに添加 洗浄 吸引によりPCR産物が メンブレンに結合 Nuclease-Free Waterで PCR産物を溶出 Collection Plate Additional protocol information is available in Technical Bulletin #TB311, available upon request from Promega or online at www.promega.com PCR クリーンナップ プロトコル 1. Vacuum Manifold Base上にBinding Plateを置く（Binding Plateは、数 字の表示されたカラムヘッダーを吸引ポート側に向ける）。Manifold Baseの吸引ポートに吸引ホースを取り付ける（右図参照）。 2. 96ウェルプレートの各PCR産物に同量のMembrane Binding Solutionを 添加（例：100 µl PCR産物に対して100 µl のMembrane Binding Solution ) 3. ピペッティングにより混和し、マニホールに載せたBinding Plateの各ウ ェルに全量を添加。室温で1分間インキュベート。 4. 約30秒、サンプルがBinding Plateを通過するまで吸引 (15 inches Hg )。 5. 新しい80% エタノール 200µl をBinding Plateの各ウェルに添加し、室 温で1分間インキュベート。約30秒間、80% エタノール がBinding Plateを通過するまで吸引。陰圧を開放。 6. ステップ5の洗浄操作をさらに2回繰り返す。 7. 3回目の洗浄操作が終わり、Binding Plateが空になったら、吸引を引き 続き4分間行い、メンブレンを乾燥させる。 8. 吸引を停止後、Manifold Baseから吸引ホースを外し、Vacuum Manifold Collarの吸引ポートに繋ぎ換える（音がするまで）。Binding PlateをManifold Baseから外し、静かに紙で余分なエタノールを吸い取 る。 9. 96ウェルU底のCollection Plateを Manifold Bedに置き、Vacuum Manifold Collar をその上に置く。U底Collection Plateは、数字の表示さ れたカラムヘッダーを吸引ポート側に向ける。 10. Binding Plateは、右図のようにCollection Plate / Manifold Collarの上に 置く。Binding Plateのノズルは、Collection Plateのウェルの中心に合わ せ、両方のプレートは同じ方向を向いている必要があります。Binding Plateの各ウェルにNuclease-Free Water 100 µl を添加し、室温で1分間 インキュベート。約1分間、溶液がBinding Plateを通過するまで吸引。 11. 吸引を停止し、Binding Plateを取り外す。さらに、慎重にManifold Collarも取り外す。Collection Plateの内壁に飛沫がある場合、軽く遠心。 溶出液量は若干の差はありますが、通常 約75µlです。 2626MB03_1A Manifold Base Manifold Base Binding Plate A. PCR Product Binding Apparatus B. Washing Apparatus C. Elution Apparatus Binding Plate Vacuum Port with Insert in place Manifold Bed Manifold Collar Binding Plate Collection Plate Quick PROTOCOL