これまでで最高のデュアルアッセイ　NanoGlo® Dual-Luciferase® Reporter Assay System

これまであきらめていたトランスフェクション効率の 低い細胞でもデュアルレポーター実験が可能に！ これまで内部標準がブレるとお悩みの方に！ “真”のデュアル実験レポーターが可能に！ NanoGlo® Dual-Luciferase® これまでで最高のデュアルアッセイ Reporter Assay System NanoDLR™ 試薬（10 ml）に 内部標準用ベクターが付属する NanoDLR ™ スターターセットを用意!! NanoLuc® 実験ベクターへの 移し換えをサポート!! （移し換え受託サービスご利用の方に NanoLuc® ベクターを30% OFF） 1 2 今なら NanoDLR™ を始める方に デュアルサポート !! （2015 年 12 月末日まで） プロメガ株式会社 NanoGlo® Dual-Luciferase® 特長 NanoLuc® ルシフェラーゼの 発光レベルがすごい ● 発光レベルが高いので、少数細胞や トランスフェクション困難な細胞でも OK ● ベクター量をおさえた実験、 内在プロモーターでも測定可能 ● 内部標準が従来のデュアルよりも飛躍的に安定 ● 従来では難しかった 実験レポーター 実験レポーター が可能に！ アプリケーション用ベクターも 新発売 ● タンパク質安定性試験（タンパク質ダイナミクス） ● NanoLuc® / ホタルルシフェラーゼ タンデムレポーターベクター （スクリーニング偽陽性低減用） 試薬の 安定性/利便性が向上 ● 室温 / 4℃ 保存ができ、繰り返しのアッセイが便利に （分注や凍結の手間が低減）！ ● 新しい ONE-Glo™ EX は臭いもなく、 安定で NanoDLR™ の構成品として単品でも販売 ホタルルシフェラーゼの消光効率が 大幅アップ（より分離されたシグナル） Reporter Assay System Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter（NanoDLR ™）Assay System は 1 つのサンプルより連続してホタルルシフェラーゼ（Fluc）と NanoLuc® ルシフェラーゼ（Nluc）の活性を測定するためのホモジニアスなアッセイシステムです。 非常に高レベルな発光を生み出す Nluc と従来よりも強力になった Fluc の消光効果（クエンチング効果）を 組み合わせることにより最大の感度と簡便で柔軟性のあるデュアルアッセイが実現しました。 Firefly Luciferase Activity Quenched Luminescence Background 1 × 101 1 × 102 1 × 103 1 × 104 1 × 105 1 × 106 1 × 107 1 × 108 1 × 109 Luminescence (RLU) 12437MA 410,000,000 121 61 (7,000,000-fold quench) クエンチング効率の改善 NanoDLR ™ Stop & Glo® Reagent は、感度を損なうことなく、ホ タルルシフェラーゼのシグナルをバックグラウンドレベル（100 万分の 1）にまで低下させるため、2 つのレポーターのシグナル を効果的に分離するとともに第 2 レポーターの測定値が安定し ます。 NanoDLR™ アッセイのより明るく安定な発光特性 TK-Rluc（ウミシイタケ）：TK-Fluc（ホタル）：キャリア DNA または TK-Nluc （NanoLuc® ）：TK-Fluc：キャ リア DNA をそれぞれ 1：1：8 の割合で HEK293 細胞にトランスフェクションし、NanoDLR™、 DLR™ または Dual-Glo® Dual-Luciferase Assay System を用いて測定した。同じプロモーターでル シフェラーゼを発現させた場合、NanoDLR™ Assay により測定した Nluc レポーターで最も明る い長時間発光シグナルが得られ、Fluc レポーターも十分明るい長時間発光シグナルが得られた。 12881MA 104 105 106 107 108 Relative Luminescence）(RLU） Rluc in DLR Fluc in DLR Nluc in NanoDLR Fluc in NanoDLR Rluc in Dual-Glo Fluc in Dual-Glo Time After Reagent Addition（minutes） 0 20 40 60 80 100 120 NanoLuc is up to 1,000X brighter than Renilla luciferase when expressed o the same promoter. RE1 Luc2 RE2 Nluc Nlu C c Lu ont c R 2 E RE1 Luc2 RE2 Nluc Nlu C c Lu ont c R 2 E 補正用レポーターは より安定、正確に 2 つの実験用レポーターでも より分離されたシグナルが得られます 2 レポーターの選択 特長 1st ベクター 2nd ベクター デュアルアッセイシステム（NanoLuc® & ホタル） NlucP （実験用） FlucP （内部標準用） 利点 最も明るく、最も応答性の高いフォーマット 推奨 細胞数が少ない場合、初代培養細胞などトランスフェクション効率が低くレポーター実験が困 難であった細胞での使用。内在性プロモーターでアッセイを行いたい場合 FlucP （実験用） NlucP （内部標準用） 利点 既存の実験用ホタルルシフェラーゼレポーターベクターをそのまま使用可能。 NanoLuc® の使用により信頼性の高い内部標準値が得られる 推奨 標準的なレポーターアッセイフォーマット。 NanoLuc® の明るさにより内部標準用レポーター DNA 量を飛躍的に低減可能 （これまで内部標準でお困りの方） NlucP （実験用） FlucP （実験用） 利点 2 つの異なるシグナル応答を同時に測定可能 推奨 一度に 2 つのシグナル経路をより高感度に測定 （ホタルのクエンチング効果が飛躍的に改善され、より分離・独立したシグナルが得られます） FlucP -P2A- NlucP -P（実験用） 利点 1 つのプロモーターより 2 つのレポーターを発現（タンデムレポーター） 推奨 スクリーニング等において真のヒット化合物と偽陽性（ルシフェラーゼ阻害剤など）を検出 転写調節レポーター＋タンパク質安定性レポーター FlucP （実験用 または内部標準用） NanoLuc ® 融合体 （タンパク質 / RNA）発現用 利点 NanoLuc® 融合体は内在レベルに近い発現レベルでも検出可能 推奨 調節タンパク質レベルの測定（タンパク質 / RNA 安定性測定）＋レポーター実験（または内部標準） 内部標準レポーターを NanoLuc 1 ® にしたい方 実験レポーターを NanoLuc 2 ® にしたい方 クローニング元 クローニング先 作業費（目安） 作業期間 確認内容 応答配列 / プロモーターの移し換え レポーターベクター （例：応答配列を含む pGL4 などの レポーターベクター） NanoLuc® レポーターベクター 13 万円 1.5-2 ヶ月 程度 インサート 全長配列確認 材料なし（新規クローニング） ※発現確認は含まれません ※要配列情報提供 14 万円 ORF の移し換え Flexi® Clone（FHC/FXC） Flexi® NanoLuc®Clone（注 1） （FHC → pFN31K または pFC32K Vector） 7.5 万円 （クローン価格） 3 週間～ インサート 全長配列確認 ※発現確認は含まれません NanoLuc® フュージョンベクター （pFN31A または pFC32A Vector） 9 万円 1.5 ヶ月～ NanoLuc® フュージョンベクター（上記以外） 12 万円 ※作業費には、クローニング元あるいはクローニング先の材料（クローン / ベクター等の費用）は含まれておらず、作業代のおおよその目安であり、作業対象や状況によ り変動します。詳細な価格についてはお見積りさせていただきます。 （注 1） Flexi® NanoLuc® Clone はクローニング元 / クローニング先のベクターは不要であり、表示の価格はクローンとしての価格です。 上記 NanoLuc® ベクターへの移し換えについての詳細、見積もり依頼は www.promega.co.jp/gotonano/ をご覧ください。 その他の カスタム NanoLuc® レポーターベクター を探すなら 3 www.promega.co.jp/casform/ をご覧ください ● タンパク質安定性試験（タンパク質ダイナミクス） ● NanoLuc® / ホタルルシフェラーゼ タンデムレポーターベクター （スクリーニング偽陽性低減用） ● 室温 / 4℃ 保存ができ、繰り返しのアッセイが便利に （分注や凍結の手間が低減）！ ● 新しい ONE-Glo™ EX は臭いもなく、 安定で NanoDLR™ の構成品として単品でも販売 NanoLuc® とホタルルシフェラーゼの使い分け 今すぐはじめよう！ NanoDLR ™ NanoDLR ™ のお試しサイズ（10 ml）に NanoLuc® 内部標準用ベクターが付いた NanoDLR ™ スターターセット がおすすめ !!（裏面参照）（2015 年 12 月末日まで） 今なら応答配列 / プロモーター 下記の移し換えサービスご利用の方に NanoLuc® ベクターが30％ OFF!! （2015 年 12 月末日まで） www.promega.co.jp/flexiclone/ NanoLuc® とホタルルシフェラーゼの使い分け 3 発光測定、自動核酸精製したいけど装置がない？ でも無くても大丈夫！ 詳細については以下をご覧ください。 RentaMAX コンサルティング & 貸出プログラム www.promega.co.jp/rentamax/ ViaFect™ Transfection Reagent は一般的に使用される付着細胞だけでな く、浮遊細胞や幹細胞由来の細胞株などトランスフェクションが難し いとされる細胞でも優れたトランス フェクション効率を示します（細胞 によってはエレクトロポレーションによる導入と同等以上の結果が得 られています）。細胞毒性もきわめて低く、健全な細胞状態を保つため、 レポーター実験に最適です。 TF-1 浮遊細胞に pGL4.32［luc2P/NF- κ B-RE/Hygro］Vector（NF- κ B 応答配列を 含むルシフェラーゼレポーター）を ViaFect™ Transfection Reagent または Amaxa Nuclefector® II（エレクトロポレーション）を用いてトランジェントにトラン スフェクションした。翌日に細胞を TNF α で 6 時間刺激し、応答を Bio-Glo™ Luciferase Reagent を用いて測定した。 ViaFect™ の導入効率と NanoLuc® の高発光でさらにパワーアップ 12105MA Luminescence (RLU) log[TNFα], ng/ml 0 –4 –2 0 2 20,000 40,000 60,000 80,000 ViaFect™ Transfection Reagent Amaxa T01 protocol 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） ViaFect ™ Transfection Reagent 0.2 ml E4983 4,500 0.75 ml E4981 55,000 2 × 0.75 ml E4982 88,000 ViaFect™ 0.75 ml は 24 ウェルプレートで 500 ウェル分。 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/viafect.html 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） NanoDLR ™ スターターセット（試薬＋コントロールベクター） 今だけのスペシャルセット（2015 年 12 月末日まで） Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay/pNL1.1.TK Bundle 1 セット N1521 39,000 Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay/pNL1.1.PGK Bundle 1 セット N1531 39,000 Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay/pGL4.54［luc2/TK］Bundle 1 セット N1541 39,000 Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay/pGL4.53［luc2/PGK］Bundle 1 セット N1551 39,000 NanoDLR ™ 試薬 Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay System 10 ml N1610 39,000 100 ml N1620 290,000 10 × 10 ml N1630 310,000 10 × 100 ml N1650 お問い合わせ ホタルシングルアッセイ試薬 ONE-Glo™ EX Luciferase Assay System 10 ml E8110 22,000 100 ml E8120 135,000 10 × 10 ml E8130 150,000 10 × 100 ml E8150 お問い合わせ NanoLuc® 転写活性レポーターベクター クローニングベクター pNL1.1［Nluc］Vector 20 µg N1001 68,000 pNL1.2［NlucP］Vector 20 µg N1011 68,000 pNL3.1［Nluc/minP］Vector 20 µg N1031 68,000 pNL3.2［NlucP/minP］Vector 20 µg N1041 68,000 pNL2.1［Nluc/Hygro］Vector 20 µg N1061 68,000 pNL2.2［NlucP/Hygro］Vector 20 µg N1071 68,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） NanoLuc® 転写活性レポーターベクター（つづき） コントロールベクター pNL1.1.PGK［Nluc/PGK］Vector 20 µg N1441 68,000 pNL1.1.TK［Nluc/TK］Vector 20 µg N1501 68,000 pNL1.1.CMV［Nluc/CMV］Vector 20 µg N1091 68,000 pNL3.2.CMV［NlucP/CMV］Vector 20 µg N1411 68,000 ベクター 解析用 シグナル pNL3.2.NF-κB-RE［NlucP/NF-κB-RE/ Hygro］Vector 20 µg N1111 68,000 HTS 偽陽性低減用 タンデムベクター pNLCoI1［luc2-P2A-NlucP/Hygro] Vector 20 µg N1461 95,000 pNLCoI2［luc2-P2A-NlucP/minP/Hygro］ Vector 20 µg N1471 95,000 pNLCoI3［luc2-P2A-NlucP/CMV/Hygro］ Vector 20 µg N1481 95,000 pNLCoI4［luc2-P2A-NlucP/PGK/Hygro］ Vector 20 µg N1491 95,000 ホタルルシフェラーゼコントロールベクター コントロールベクター pGL4.53［luc2/PGK］Vector 20 µg E5011 68,000 pGL4.54［luc2/TK］Vector 20 µg E5061 68,000 NanoLuc® タンパク質安定性レポーターベクター Flexi® クローニング用 ベクター pFN31A Nluc CMV-Hygro Flexi® Vector 20 µg N1311 68,000 pFC32A Nluc CMV-Hygro Flexi® Vector 20 µg N1331 68,000 pFN31K Nluc CMV-neo Flexi® Vector 20 µg N1321 68,000 pFC32K Nluc CMV-neo Flexi Vector 20 µg N1341 68,000 マルチ クローニング用 べクター pNLF1-N［CMV/Hygro］Vector 20 µg N1351 68,000 pNLF1-C［CMV/Hygro］Vector 20 µg N1361 68,000 ベクター 標的融合 pNLF1-HIF1A［CMV/neo］Vector 20 µg N1381 68,000 pNLF1-NRF2［CMV/neo］Vector 20 µg N1391 68,000 ベクターの選択やアッセイの詳細については www.promega.co.jp/nanoDLR/ をご覧ください。 おすすめトランスフェクション試薬 製品案内 サンプルサイズ（0.2 ml）は 先着 50 名様限り！！ テクニカルサービス ● Tel. 03-3669-7980／Fax. 03-3669-7982 ● E-Mail : prometec@jp.promega.com PK1504-04 販売店 日本語 Web site：www.promega.co.jp プロメガ株式会社 本　　　社　〒103-0011 東京都中央区日本橋大伝馬町14-15 マツモトビル Tel. 03-3669-7981／Fax. 03-3669-7982 大阪事務所　〒532-0011 大阪市淀川区西中島6-8-8 花原第8ビル704号室 Tel. 06-6390-7051／Fax. 06-6390-7052 ※製品の仕様、価格については2015年4月現在のものであり予告なしに変更することがあります。