パーソナルな DNA・RNA 自動精製ユニット Maxwell® RSC

パーソナルな DNA・RNA 自動精製ユニット Maxwell® RSC 核酸精製の 自動化システム PCR が阻害される！ がん研究分野 FFPE、細胞、組織、血漿、唾液から （ccfDNA, miRNA, Total RNA, gDNA） イチゴ ccfDNA, miRNA FFPE 大腸菌 スギ 植物 / 農学研究分野 植物・穀物・食品から 微生物 / 水産研究分野 細菌 / 糞便 / 土壌、魚類組織から Maxwell® RSC Instrument カタログ番号 AS4500 ￥2,800,000 サンプルからでも NGS・qPCR 分析 クオリティーの 核酸を自動調製 多糖類・フェノール が混入する！ 難しい 収量が少ない！ ばらつく！ 難しい プロメガ株式会社 生検 ガ ン サンプル ホルマリン 固定サンプル qPCR NGS miRNA gDNA RNA ccfDNA 血液 ccfDNA や miRNA を安定に、しかも自動で精製 市販される多くの核酸精製システムにはシリカベースのビーズやメンブレンが広く利用されていますが、植物サンプルや動 物組織など複雑で夾雑物を多く含むサンプルでは非特異的な生体成分が核酸とともに抽出され、純度の高い核酸を精製 することは困難でした。プロメガの新しい Maxwell® Kit の多くは非特異的な結合が少なく、結合容量の高いセルロースビー スを採用しており、核酸の精製が困難とされるサンプルからでも純度よく精製することができます。特に植物サンプルの 場合、シリカベースの精製法や CTAB のみを用いた方法に比べ約 2 倍の収量と高い純度が得られます（参考文献 1）。 難サンプルからの核酸精製には“セルロース”マグネットビーズが威力を発揮！ 参考文献 1. Moeller, J.R., Moehn, N.R., Waller, D.M., and Givnish, T.J., “Paramagnetic Cellulose DNA Isolation Improves DNA Yield and Quality Among Diverse Plant Taxa,”Applications in Plant Sciences, 2(10) 2014. 組織、細胞、血液からのゲノム DNA、RNA の精製も数多くの実績を有しており、 NGS や qPCR が行える高純度の核酸を自動で精製することができます。 Maxwell® RSC は上記以外の核酸精製に幅広くご利用いただいています。 www.promega.co.jp/pur_search.html ※詳細についてはお問合せください。 ●尿、血漿、脳脊髄液（CSF）からの ccfDNA や cfRNA の精製についても実績アリ！ ● FFPE サンプルからの miRNA 精製にもチャレンジ中！ 課題 FFPE からの核酸の回収率が著しく低く、脱パラフィンに使用する危険 なキシレンも使いたくない。 解決 Maxwell® RSC 法ならキシレンを使用せずにパラフィンを除き、収量良 く核酸を精製できます。 FFPE（ホルマリン固定パラフィン包埋）サンプル もちろん　その他標準的な核酸種やサンプルでも！ “核酸精製スペシャリスト”が目的に合わせて最適の試薬キット・プロトコルをご提案 いたします。その他の難しい核酸精製についてもまずはお問合せください。 がん関連 製品名 製品名 価格（￥） Maxwell® RSC ccfDNA Plasma Kit AS1480 96,000 Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit AS1460 41,000 Maxwell® RSC RNA FFPE Kit AS1440 41,000 植物、食品、その他 製品名 製品名 価格（￥） Maxwell® RSC PureFood GMO and Authentication Kit AS1600 35,000 Maxwell® RSC Plant DNA Kit AS1490 29,000 Maxwell® RSC Plant RNA Kit AS1500 39,000 がん研究分野の 難 精製物 ccfDNA & miRNA ※各キットには 48 サンプル分の試薬およびカートリッジが含まれます。 　上記の他、合計 21 種類のキットをご用意しています（www.promega.co.jp/product/automat/applications_rsc.html）。 サ 難 ンプル 精 難 製物 精 難 製物 最難サンプル Maxwell® RSC により血漿サンプルから精製した ccfDNA の増幅 精製した DNA は GoTaq® qPCR Master Mix で RNaseP, APP and TERT の各遺伝子を増幅した。 セルロースビーズの高い結合容量により、サンプル中の含有量が少ないccfDNAやmiRNAでも高収率に精製することができます！ 31.50 31.00 30.50 30.00 29.50 29.00 28.50 28.00 27.50 Ave Cq RNaseP Ave Cq value 28.83 APP 30.73 TERT 31.01 課題 生体に多種類存在する miRNA を幅広く安定して精製したい。 解決 セルロースビースの優れた特性により幅広い種類の miRNA を安定して 精製することができます。 miRNA 課題 サンプルに含まれる ccfDNA はごく微量であり、高収率 / 安定に ccfDNA を精製することは難しい。 解決 結合容量の高いセルロースビースを使用する Maxwell® RSC 法 は従来 法よりも操作が大幅に簡略化され、NGS 分析などに十分な ccfDNA が 安定して得られます。 ccfDNA 実（果実） サンプル量：60 mg 濃度：74 ng/µl 収量：3.4 µg A260 / A280：2.05 A260 / A230：1.96 葉 サンプル量：40 mg 濃度：500 ng/µl 収量：23.5 µg A260 / A280：1.99 A260 / A230：1.92 最新実績：イチゴ RNA 多糖類、フェノール類などの PCR 阻害物質を含むサンプルからでも難なく精製 Maxwell® による植物難サンプルからの DNA 精製 スギ、ブナおよびマツの葉から得られた溶出液1µgよりGoTaq® qPCR Master Mix (Cat. #A6001) およびユニバーサルプラントプライマーを用いて qPCR を行った（ N=3 ）。 トウモロコシ 大豆 Maxwell® よる植物からの miRNA 精製と RT-qPCR トウモロコシ、大豆、シロイヌナズナの葉よりRNA を精製し miRNA 特異的プライマー で RT-qPCR を行った。 ※ Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit を使用。 ※種子からのウィルス RNA 抽出など特殊なアプリケーションの実績もございます。 マニュアル法から Maxwell® 自動精製に変えたらこんなに楽 前処理 核酸精製 核酸定量 Maxwell® RSC 自動化 従来法 （マニュアル法） マニュアル精製（約 60 分）*RNA 精製の場合 精製 & 核酸定量 細胞・組織・ 血液 測定 洗浄 乾燥 分光光度計 溶解 吸着 洗浄 DNase 処理* 溶出 精製 30分～ 1時間 ・遠心機と実験台を何度も往復 ・細切れ作業で手が離せない ・サンプルの取り間違えが心配 空いた時間で… ・その他の検査を！ ・デスクワークしよう！ ・その間に昼食を！ 前処理不要 または 10分！ サンプル 果実 & 穀物 www.promega.co.jp/pur_search.html 参考文献 2. Guerlter, P. et al. (2013) “Development of a CTAB buffer-based automated gDNA extraction method for the surveillance of GMO in Seed.” Food Res. Technol. 236, 1–8. 課題 糖分や油分を多く含む植物由来の加工食品などからのゲノム DNA 精製は非常に困難。 解決 CTAB 法を組み合わせた新しい Maxwell® RSC PureFood GMO and Authentication Kit は不純物を除去し効率よく穀物や加工 食品からゲノム DNA を精製することができます。 課題 果実や木葉は多糖類や二次代謝産物などの不純物を 多く含むため核酸の精製が難しく、PCR が阻害される 場合もある。 解決 セルロースビースは非特異的な吸着が少ないため、 純度の高い核酸を精製することができます。 植物から miRNA を精製することもできます（下図）。 穀物・食品サンプル その他 組織、血漿、血清、魚のヒレ / エラなどから感染した細菌・ ウイルスの核酸や動物の組織や血液からのゲノム DNA、Total RNA の抽出も可能です。 糞便・口腔などの細菌叢解析や土壌中からの DNA 抽出にも利用可能です。また、食品中の食 中毒菌検査の実績あります。 微生物サンプル 水産・家畜サンプル 植物分野の 13119M 25.6 26.0 A 25.2 27.7 25.8 23.5 24.0 24.5 25.0 25.5 26.0 26.5 27.0 27.5 28.0 28.5 miR172 miR156 miR164 miR163 miR168 Cq 難 サ 難 ンプル セルロースビーズは非特異的な結合が抑えられるので不純物の少ない核酸を精製することができます！ 植物（果実や木葉）サンプル アプリケーション情報はプロメガホームページへアクセス！　随時、更新中です！ 分注装置を用いた多検体精製への応用についてもお気軽にお問合せください。 Ct 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 もちろん、シロイヌナズナやイネなど標準的なモデル植物からも 簡便に核酸を精製することができます。 このシステムより GMO 混入率 0.033% 以下でも検出を可能にした 事例がございます（参考文献 2.） CTAB 法と Maxwell® の組み合わせは農作物 ( 植物 ) だけでなく、 食中毒菌検査にも応用可能で、食肉加工品、水産加工品からのゲ ノム DNA を抽出した実績もございます。 シロイヌナズナ スギ ブナ マツ プロメガクラブ 研究応援プログラム（核酸精製編） スペシャリストによる訪問トレーニング プロメガ学術部による訪問セミナー コンサルティング＆機器貸出し RentaMAX プロメガ寺子屋 オンサイトセミナー 弊社スペシャリストが皆様のラボで実験トレーニングを実施 します。セットアップの方法やちょっとしたノウハウなど、 実際に手を動かして覚えられます。 核酸精製に失敗しないためのポイントやコツを伝授いたし ます。マニュアル法やミドル～ハイスループットな核酸精製 まで用途に合わせてご説明いたします。 RentaMAX はプロメガの自動核酸精製装置を無料で一定期間お貸出しするサービスです※。試薬／機器の両面からのサポート、 コンサルティングも行います。※アプリケーションによっては機器で使用する試薬を予めご購入いただく必要がございます。 プロメガユーザーのための会員サービス、プロメガクラブにご登録いただけますと、 上記を含む様々な研究応援サービスを無償にてご提供いたします。入会費、年会費 など一切無料です。詳しくはホームページをご覧ください。 まずは検索 プロメガクラブ 検 索 ① お問合せ ② お打合せ ③ お客様による サンプルの準備 ④ 機器の到着 ⑤ 機器を用いた ⑥ 機器の返送 実験 ⑥ 機器の返送 専用フォームよりご希望の 機器、実験内容をお知らせ ［10 分程度］ 機器、試薬の 選択、期間 ［1 時間程度］ サンプルの採取、 細胞培養など レンタル開始 レンタル終了 貸出しの流れ www.promega.co.jp/rentamax www.promega.co.jp/terakoya/ RentaMAX詳細、 お問合せ・申込みフォーム 寺子屋とオンサイトセミナー の詳細な内容、お申込みは 実験初心者です 核酸精製の 原理やコツとは？ 核酸精製を自動化したい 大塚：「収穫時期の後は核酸抽出作業の嵐が始まるな ….」 大塚：「な、なんだって～！？」 工藤：「ちょっと待って大塚くん、プロメガで自動核酸 精製装置を借りれるそうだよ！」 大塚くん 工藤くん テクニカルサービス ● Tel. 03-3669-7980 ／ Fax. 03-3669-7982　● E-Mail : prometec@jp.promega.com PK1609-02B 販売店 日本語 Web site：www.promega.jp プロメガ株式会社 本　　　社　〒103-0011 東京都中央区日本橋大伝馬町14-15 マツモトビル Tel. 03-3669-7981／Fax. 03-3669-7982 大阪事務所　〒532-0011 大阪市淀川区西中島6-8-8 花原第8ビル704号室 Tel. 06-6390-7051／Fax. 06-6390-7052 ※製品の仕様、価格については2016年9月現在のものであり予告なしに変更することがあります。