プロテオーム分析

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プロテオームガイド

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プロテオームガイド 発現・精製＆相互作用解析・同定 Contents： • イントロダクション 2 • タンパク質発現 4 Flexi® HaloTag® ORF Clone、TNT® System • タンパク質精製 & 相互作用解析 6 HaloTag® System • タンパク質分析用プロテアーゼ 8 ProteaseMAXTM、他 2 イントロダクション タンパク質相互作用の研究において、抗体はネイティブタンパク質を認識し、検出あるいは分離するための重要なツールとし て使用されてきました。しかし、抗体を用いる手法は、抗体の可用性、特異性など抗体自体のクオリティーに大きく依存して います。他方で、標的タンパク質との結合が弱いあるいは細胞内の存在量が低いなど抗体がうまく機能しない場合にはエピトー プタグおよび親和性タグを使用する場合も多くあります。このような手法ではリコンビナントタンパク質を発現させるために DNA ベクター / クローンを調製、入手する必要がありますが、標的タンパク質ごとに抗体を用意することに比べると、非常に 簡便、低コストであり、多検体の処理にも適しています。プロメガでは HaloTag® をはじめ多くのアフィニティータグのシステ ムを有しており、無細胞発現系やタンパク質分析用のプロテアーゼなどプロテオーム研究に必要な試薬を取り揃えています。 Analysis – ProteaseMAX™ Surfactant – Immobilized Trypsin – Trypsin Gold, Mass Spec Grade – Sequencing Grade Modified Trypsin – Chymotrypsin, Sequencing Grade – rLys-C, Mass Spec Grade – Endoproteinase Lys-C, Sequencing Grade – Asp-N & Glu-C, Sequencing Grade プロテアーゼ (8 ページ ) タンパク質同定の決め手は良質な酵素選びから！ Expression Interaction & Purification HaloTag®　 (6-7 ページ ) GST タグ (7 ページ ) His タグ (7 ページ ) – HaloTag® Mammalian Protein Purification System – HaloTag® Protein Purification System – HaloTag® Mammalian Pull-Down System – HaloLink™ Protein Array System – HaloCHIP™ System – MagneGST™ Pull-Down System – MagneGST™ Protein Purification System – MagneHis™ Protein Purification System – HisLink™ Spin Protein Purification System – Maxwell® 16 Polyhistidine Protein Purification Kit 共有結合でガッチリ捕捉 ＆ アプリも豊富 磁性体粒子により効率的なプルダウン、精製が可能 レジンと磁性体粒子より選択可能。自動化にも最適 共有結合でタンパク質を高度に分離 Clone 無細胞発現 (5 ページ ) 哺乳動物発現 (4 ページ ) TNT® System – Rabbit Reticulocyte – Insect – Wheat Germ – E.coli – FuGENE® Transfection Reagent タグ付き タンパク質発現クローン (4 ページ ) – Flexi® ORF Clone　（HaloTag®） 哺乳動物細胞での発現実験を強力サポート 　 HaloTag® 導入済みのヒト遺伝子クローン（＞7,000） チューブ内、約数時間で簡便に タンパク質を合成 3 9 6 12 そのまま発現実験へ タンパク質発現まで 1～数時間 切れ味鋭い酵素でタンパク質同定率アップ！ このクローンコレクションは、 かずさ DNA 研究所との コラボレーションにより実現しました。 TEV 切断サイト HaloLinkTM HT POI TEV 切断 SDS/ 尿素 溶出 POI 目的タンパク質 (Protein of Interest) HaloTag® 長鎖に特化したかずさ cDNA コレクションと幅広いラ タンパク質 イ ン ナ ッ プ の OC（The ORFeome Collaboration） ORF コレクションの 2 つのリソースをベースとした 独自のクローンリソース Focused Technology Flexi ® HaloTag® ORF Clone この ORF クローンはかずさ DNA 研究所の保有 するヒト長鎖 cDNA を HaloTag® 融合遺伝子と してそのままタンパク質発現実験に使用するこ とができます。配列情報はもとより、ほとんど のクローンは実際の哺乳動物細胞内での発現ま で確認しており安心してご利用いただけます。 Focused Technology TNT® System TNT ® システムを用いれば数時間のインキュベー ションの間にチューブ内で転写 / 翻訳がおこる ため、鋳型 DNA を反応に加えるだけでタンパク 質を調製することができます。 動物細胞での発現を確認済み HEK293 細胞に Flexi ® HaloTag® ORF Clone を導入し、 HaloTag® TMR Ligand で標識。 数時間で機能性タンパク質を発現 S30 T7 High-Yield Protein Expression Systemを用いたGreen® Fluorescent Protein（hMGFP）の無細胞発現 1 2 4 6 8 22 hours プロテオームガイド 3 Analysis – ProteaseMAX™ Surfactant – Immobilized Trypsin – Trypsin Gold, Mass Spec Grade – Sequencing Grade Modified Trypsin – Chymotrypsin, Sequencing Grade – rLys-C, Mass Spec Grade – Endoproteinase Lys-C, Sequencing Grade – Asp-N & Glu-C, Sequencing Grade プロテアーゼ (8 ページ ) タンパク質同定の決め手は良質な酵素選びから！ Expression Interaction & Purification HaloTag®　 (6-7 ページ ) GST タグ (7 ページ ) His タグ (7 ページ ) – HaloTag® Mammalian Protein Purification System – HaloTag® Protein Purification System – HaloTag® Mammalian Pull-Down System – HaloLink™ Protein Array System – HaloCHIP™ System – MagneGST™ Pull-Down System – MagneGST™ Protein Purification System – MagneHis™ Protein Purification System – HisLink™ Spin Protein Purification System – Maxwell® 16 Polyhistidine Protein Purification Kit 共有結合でガッチリ捕捉 ＆ アプリも豊富 磁性体粒子により効率的なプルダウン、精製が可能 レジンと磁性体粒子より選択可能。自動化にも最適 共有結合でタンパク質を高度に分離 Clone 無細胞発現 (5 ページ ) 哺乳動物発現 (4 ページ ) TNT® System – Rabbit Reticulocyte – Insect – Wheat Germ – E.coli – FuGENE® Transfection Reagent タグ付き タンパク質発現クローン (4 ページ ) – Flexi® ORF Clone　（HaloTag®） 哺乳動物細胞での発現実験を強力サポート 　 HaloTag® 導入済みのヒト遺伝子クローン（＞7,000） チューブ内、約数時間で簡便に タンパク質を合成 3 9 6 12 そのまま発現実験へ タンパク質発現まで 1～数時間 切れ味鋭い酵素でタンパク質同定率アップ！ このクローンコレクションは、 かずさ DNA 研究所との コラボレーションにより実現しました。 TEV 切断サイト HaloLinkTM HT POI TEV 切断 SDS/ 尿素 溶出 POI 目的タンパク質 (Protein of Interest) HaloTag® 長鎖に特化したかずさ cDNA コレクションと幅広いラ タンパク質 イ ン ナ ッ プ の OC（The ORFeome Collaboration） ORF コレクションの 2 つのリソースをベースとした 独自のクローンリソース HaloTag® HaloTag® はバクテリア由来の約 30KDa のタンパク質で特殊な化学合成リガンド をコートした担体（HaloLinkTM ）と特異的に共有結合を形成するため、HaloTag® 融合タンパク質を効率よく捕捉します。他のタグと担体との結合力に比べ非常に 強力であるためタンパク質の精製や相互作用タンパク質のプルダウンに威力を発 揮します。また、蛍光リガンドを用いることにより融合タンパク質を可視化する ことができ、幅広いタンパク質分析に用いることができます。 5619TAj HaloLinkTM HT GST 共有結合 GST Resin HT GST 弱い結合 上清 10分後 24時間後 10分後 24時間後 HaloTag® と GST の結合力の違い HaloTag® -GST融合タンパク質をHaloLink TM ResinおよびGST 結合レジンで捕捉し、洗浄後に表示時間インキュベー ションした。上清を SDS-PAGE により分析。24 時間後でも HaloLink TM からのHaloTag® -GST融合タンパク質の遊離は確認 されなかった。 Focused Technology Focused Technology ProteaseMAXTM Surfactant このプロテアーゼ消化促進剤は、タンパク質の 可溶化、プロテアーゼの消化効率向上、ペプチ ドの回収率改善を可能にするため質量分析など のタンパク質解析に最適です。 7514MB ProteasMAX™ プロトコル ProteasMAX™ Surfactant O/N インキュベーション 3時間消化 ProteasMAX™ が長いペプチドの抽出を助け、 消化終了時には分解される。 ProteasMAX™ によりタンパク質が 伸ばされトリプシンによる消化効率が向上 分解した ProteasMAX™ トリプシン タンパク質 標準プロトコル 抽出されたペプチド 長いペプチドは拡散しにくく ゲル内にトラップされる 抽出されたペプチド タンパク質 ゲル片 ProteaseMAXTM Surfactant の作用原理 HaloTag® ガイド 包括的なタンパク質解析のツール Contents： • イントロダクション HaloTag®ベクター HaloTag® ORFクローン • 細胞内イメージング 蛍光リガンド・抗体 • ェイス ルスチ パ • タンパク質間相互作用 HaloLinkTM Resin/Beads HaloTag® Pull-Down System HaloLinkTM Array • タンパク質-DNA相互作用 HaloCHIPTM System • パク質 タ ン 発現・精製 HaloTag® Protein Purification system • その他のアプリケーション紹介 HaloTag®テクノロジーについてはHaloTag® ガイド および HaloTag® スターターガイドをご覧下さい （www.promega.co.jp/halotag/）。 4 タンパク質発現 : ヒトORFクローン Flexi® HaloTag® ORF Clone タンパク質を調べるならORFクローンが近道です。 かずさDNA研究所が収蔵するヒト長鎖cDNAは、分子量の大きなタンパク質をコードしている割合が高く、生体機能に重要な 役割を持つものと予想されています。Flexi ® HaloTag® ORF Cloneはこれらの有用な遺伝子リソースをHaloTag® Flexi ® Vectorに 導入したクローンコレクション（7,217ヒト-クローン）で哺乳動物細胞やin vitroでの発現実験にそのままご利用頂けます。発現 したHaloTag®融合タンパク質は専用の担体や蛍光リガンドと共有結合を形成するため目的タンパク質の精製やイメージングに威 力を発揮します（HaloTag®については6, 7ページを参照ください）。これらのクローンは弊社WEBページより簡単にご注文いた だけ、通常2週間程度でお届けすることができます。 FuGENE® HD & 6 Transfection Reagent 細胞生存性を維持しながらタンパク質発現量を最大限に！ FuGENE® HD Transfection Reagent は、広範な細胞株に対して高効率にDNA をトランスフェクションするためにデザインさ れた新規な非リポゾーム試薬で、毒性も低く抑えられています。プロトコルでは血清や培地を除く必要がなく、試薬 /DNA 複 合体を添加した後に洗浄や培地交換は不要です。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） ORF クローン Flexi ® HaloTag ® Type（pFN21A + ORF） 1 クローン FHCxxxxx 50,000~ ※詳細については。www.promega.co.jp/flexiclone/ をご覧下さい。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） トランスフェクション FuGENE ® HD Transfection Reagent 1ml E2311 55,000 5X1ml E2312 220,000 FuGENE ® 6 Transfection Reagent 1ml E2691 55,000 5X1ml E2692 220,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） 関連製品 プラスミド精製（トランスフェクショングレード） PureYield TM Plasmid Miniprep System 100 回分 A1223 22,000 250 回分 A1222 48,000 PureYield TM Plasmid Midiprep System 25 回分 A2492 27,000 PureYield TM Plasmid Maxiprep System 10 回分 A2392 25,000 1 – 500 1001 – 1500 2001 – 2500 3001 – 3500 4001 – 4500 5001 – 5500 6001 – 6500 7001 – 7500 8001 – 8500 9001 – 9500 10000 < 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 UniGene Build #172: GenBank (24 Jun 2004), dbEST (24 Jun 2004) Human (15,695) KIAA (2,037) 遺伝子 (cDNA) の個数 cDNAの長さ（塩基対） 全長塩基配列が決定されたヒトcDNAのサイズ分布 全長塩基配列が決定されたヒト cDNA のサイズ分布 UniGene Build #172: GenBank（24 Jun 2004）, dbEST（24 Jun 2004） Flexi ® HaloTag® ORF Clone のスペック • 蛍光顕微鏡観察：HaloTag® TMR ligand を 用いたHaloTag® 融合タンパク質の細胞内 局在性観察を実施 • タンパク質発現確認：SDS-PAGE分析によ るHEK293細胞でのHaloTag® 融合タンパク 質発現を確認 • インサートサイズ確認：アガロースゲル電 気泳動によるサイズ確認 • 配列確認：シングルパス- シークエンシン グによる5’, 3' 両末端の配列確認 他社試薬とのタンパク質発現および生存性の比較 FuGENE® HD は他社競合品に比べ高いトランスフェクション効率と生存 性を示した。 8630MB 1000 2000 3000 4000 5000 200,000 400,000 600,000 0 0 800,000 Transfection Reagent Luciferase Reporter Viability Reporter Activity (RLU) Viability (RFU) None Reagent A Reagent B FuGENE® HD タンパク質発現 : トランスフェクション プロテオームガイド 5 タンパク質発現 : 無細胞タンパク質発現システム TNT® in vitro transcription/Translation System 簡単、スピーディーにタンパク質を発現させるなら… タンパク質の発現実験は非常に煩雑で、結果が得られるまでに数多くの工程が含まれ、多大の労力や培養コストを必要としま す。無細胞発現システムは細胞ベースの発現系に比べてよりシンプルにタンパク質を取得することができます。TNT® Systemは プラスミドやPCR断片を鋳型としてチューブ内でRNAへの転写／タンパク質への翻訳を行うことのできる便利、迅速なタンパ ク質無細胞発現システムです。手間のかかるin vitroでのRNA合成を行う必要がなく、DNAを添加後1時間～数時間程度のイン キュベーション（25–30°C）でタンパク質を合成することができます。転写/翻訳に必要な全ての成分は各TNT® Systemの構成品 に含まれています。多くのシステムでマスターミックスとして試薬が供給されるため、分注ステップを大幅に削減できます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） TNT® システム ウサギ網状赤血球由来 TNT ® T7 Quick Coupled Transcription/Translation System 40 回分 L1170 68,000 TNT ® SP6 Quick Coupled Transcription/Translation System 40 回分 L2080 78,000 昆虫細胞（Sf21）由来 TNT ® T7 Insect Cell Extract Protein Expression System 40 回分 L1102 82,000 10 回分 L1101 23,000 小麦胚芽抽出液 TNT ® SP6 High-Yield Protein Expression System 40 回分 L3260 75,000 10 回分 L3261 22,000 大腸菌抽出液 S30 T7 High-Yield Protein Expression System 24 回分 L1110 65,000 8 回分 L1115 25,000 標識試薬（蛍光 / 化学発光 / 発色） FluoroTect TM GreenLys in vitro Translation Labeling System（蛍光） 20-40 回分 L5001 50,000 TranscendTM Chemiluminescent Non-Radioactive Translation Detection System（化学発光） 1 システム L5080 43,000 Transcend TM Non-Radioactive Translation Detection System（Colorimetric）（発色） 1 システム L5070 30,000 6634MA TNT® 転写/翻訳反応 NH3 プラスミドDNA PCR断片 mR N A 標的タンパク質の 遺伝子配列 タンパク質 TNT® 無細胞発現システムの利点 • 培養細胞/菌体ベースの発現システムに比べ迅速（数日の 工程が数時間に短縮され、スクリーニング等にも最適。） • 柔軟性のあるタンパク質発現系（タンパク質の標識が 容易で抗体が無くても検出できます。キナーゼなど毒 性のあるタンパク質も発現可能） • 用途によってシステムを選択可能（真核生物系は活性/ 溶解性、原核生物系は収量が期待されます） システム 鋳型 アプリケーション 製品名 抽出液由来 環状 DNA 直鎖状 DNA RBS* 要求 Kozak 推奨 真核生物 タンパク 質分析 原核生物 タンパク 質分析 構造 解析 収量※ 真 核 TNT® Quick Coupled Transcription/ Translation System ウサギ網状 赤血球 P P P P 最大 300ng TNT® T7 Insect Cell Extract Protein Expression System 昆虫培養 細胞 P P P 最大 4µg TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System 小麦胚芽 P P P P 最大 5µg 原 核 S30 T7 High-Yield Protein Expression System 大腸菌 P P P P 最大 25µg ・上記以外の TNT® System についてはお問い合わせください。 ※ 50µl 反応あたりの収量 *RBS : ribosomal binding site（リボゾーム結合サイト） プロメガの無細胞発現システムの特性 7871TA M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A. B. 真核生物由来のタンパク質発現 転写 / 翻訳反応は TNT® Quick Coupled Transcription/Translation System （カタログ番号 L1170）および FluoroTect TM GreenLys tRNA（カタログ 番号 L5001）（1 µl）を用いて行った。反応後、5µl を分取し、導入され なかった FluoroTect TM tRNA を除去するために RNase-ONETM で処理し、 SDS-PAGE に供した。レーン M. 蛍光マーカー、レーン 1. ネガティブ コ ン ト ロ ー ル（No-DNA）、 レ ー ン 2-11. 9.7~255KDa の ヒ ト タ ン パ ク質 10 種（遺伝子シンボル：SMPX, MAR1, BTG1, CASP6, MAPK14, CYP3A4, PRKCG, MCM5, ERBB2, PTPRZ1 ）、レーン 12. ルシフェラーゼ。 TNT® システムの概要 kDa 155 – 98 – 63 – 40 – 32 – 21 – 11 – 6 タンパク質精製 HaloTag® Mammalian Protein Purification System これまでになかった強力なタンパク質精製システム！ 哺乳動物細胞ライセートからのHaloTag® 融合タンパク質の精製に最適化されたキットです。HaloTag® 融合タンパク質は HaloLinkTM Resinと高い特異性で共有結合を形成します。このHaloLinkTM Resinへの共有結合と非特異的な結合の低さにより、 哺乳動物培養細胞での発現レベルが低い場合でもリコンビナントタンパク質を非常に高い純度、収率で精製することができま す。HaloTag® Mammalian Protein Detection and Purification System （カタログ番号 G6795, G6799） にはHaloTag® 染色用の HaloTag® TMRDirect TM Ligandが付属しており、簡便にHaloTag®融合タンパク質を蛍光検出できるため、発現・精製条件を迅速 に最適化することができます。システムに付属するHaloLinkTM Resinの結合容量はHaloTag® 融合タンパク質 >7mg/ml （FLAG® の約10倍）で、回収率も通常>75%です。非特異的な結合も非常に少なく（< 0.1%） 高純度のタンパク質を精製することがで きます。 9667TB HaloTag® FLAG® 3xFLAG® His6 tag HaloTag® FLAG® 3xFLAG® His6 tag PKCγ PI3Kγ kDa 150 75 50 37 86 60 52 31 88 40 58 33 % Recovery ≥95 74 77 34 ≥95 45 50 21 % Purity HaloTag® およびその他のタンパク質タグの精製効率の比較 2 つのタンパク質（PKCγ、PI3Kγ）の精製において HaloTag® の回収率およ び純度は FLAG® タグおよび His タグよりも優れていた。また、HaloTag® で精製したキナーゼは活性も有していた。 Ohana, R.F. et al.（2011）HaloTag-based purification of functional human kinases from mammalian cells. Protein Expr. Purif. Apr; 76（2）: 154-64. 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） HaloTag® 精製システム 哺乳動物細胞からの精製システム HaloTag ® Mammalian Protein Purification System 1 システム G6790 84,000 HaloTag ® Mammalian Protein Detection and Purification System 1 システム G6795 94,000 HaloTag ® Mammalian Protein Detection and Purification System Sample Pack 1 システム G6799 38,000 タグの切除 HaloTEV Protease 1000u G6601 20,000 4000u G6602 60,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） その他の HaloTag® 製品 大腸菌からのタンパク質精製 HaloTag ® Protein Purification System Sample Pack 1 システム G6270 80,000 HaloTag ® Protein Purification System 1 システム G6280 300,000 レジン担体 HaloLink TM Resin 1.25ml* G1912 30,000 2.5ml* G1913 59,000 10ml* G1914 72,000 25ml* G1915 150,000 HaloLink TM Magnetic Beads 40 回分 G9311 16,000 プロテインアレイ HaloLink TM Array（TNT ® T7 Quick）Two Slide System 2 × 50 ウェル アレイ分 G6140 80,000 HaloLink TM Array（TNT ® SP6 Wheat Germ）Two Slide System 2 × 50 ウェル アレイ分 G6180 80,000 クロマチン免疫沈降様システム HaloCHIPTM System 20 回分 G9410 85,000 抗体 Anti-HaloTag ® pAb 200μg G9281 52,000 ベクター pFN21A（HaloTag ® 7）CMV Flexi ® Vector 20μg G2821 48,000 * 沈殿状態のレジン容量（懸濁した場合の総ボリュームは 4 倍量） HaloTag® の詳細については www.promega.co.jp/halotag/ をご覧下さい。 ※リガンド購入における注意点：HaloTag® Technology で使用するリガンドをプロメ ガ以外で作製・入手する場合、または研究用途以外でご使用される場合、ライセンス 契約の必要があります。詳細については弊社までご連絡ください。 HaloTag® Protein Purification Systemの特長 • 多くのタンパク質を精製 : HaloLink TM Resin への共有結合 容量 >7mg/ml HaloTag® 融合タンパク質（FLAG® の 10 倍 以上）。高い回収率（通常 > 75%） • 高純度 : 共有結合により、結合タンパク質を損失するこ となく強い洗浄が可能となるため非常に低い非特異的結 合（<0.1%）と高純度タンパク質回収を実現 • スケール変更が自在 : スケールアップ / ダウンが容易で、 mg オーダー以上の精製も可能 • 哺乳動物のタンパク質発現に最適化 : HaloTag® プラット フォームならばタンパク質精製からプルダウン、細胞内 イメージングを単一のコンストラクトで柔軟に実施可能。 9532MA HaloTag® protein POI POI HaloLink™ Resin HaloLink™ Resinへの HaloTag® 融合タンパク質 (POI)の共有結合 HaloLink™ Resinに 共有結合した状態の HaloTEV Proteaseが POI を切除 HaloLink™ Resin POI POI 精製された 目的タンパク質 の回収 HaloTEV Protease Protein of Interest HaloTag® Mammalian Protein Purification System の操作 クローン & ベクター HaloTag® 融合タンパク質を哺乳動物細胞で発現させるには Flexi ® HaloTag® ORF クローン（4 ページ参照）あるいは pFN21A などの Flexi ® HaloTag® Vector が必要です。Flexi ® HaloTag® Vector は用途に合わせて幅広いラインナップをそ ろえています。詳細については www.promega.co.jp/flexicloning/vectors をご覧 ください。 プロテオームガイド 7 タンパク質相互作用解析（プルダウン） HaloTag® Mammalian Pull-Down System より多くの複合体構成タンパク質を取得可能 HaloTag® Mammalian Pull-Down and Labeling Systemは、HaloTag® 融合タンパク質の特性を利用しており、HaloLinkTM Resinとの 高い特異性と共有結合により濃度の低いタンパク質複合体を迅速、効率的に哺乳動物細胞ライセートより捕捉することができま す。HaloLinkTM Resinの非特異的結合の少なさと迅速な結合により、多量体の捕捉ならびにそれらの構成タンパク質同定の成功率 を向上させることができます。本システムには HaloTag® TMRDirect TM Ligandも含まれており、同じ遺伝子コンストラクトを用い て複合体形成との相関的な細胞内局在やリアルタイムイメージも観察でき、タンパク質機能の理解に役立ちます。 関連製品 GST & His Tag Related Product GSTタグやHisタグはこれまでタンパク質分析に広く使用されてきた実績のあるツールです。コストも比較的安く、多検体の処理 にも適しています。プロメガではGSTタグおよびHisタグ融合タンパク質を捕捉するためのレジン担体や磁性体粒子も提供してお り様々なフォーマットでタンパク質精製を行うことができます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） HaloTag® プルダウンシステム プルダウンシステム HaloTag® Mammalian Pull-Down & Labeling System 24 回分 G6500 88,000 HaloTag® Mammalian Pull-Down System 24 回分 G6504 56,000 別売品 HaloLinkTM Resin レジン 2.5ml* G1913 59,000 レジン 25ml* G1915 150,000 HaloTag® Control Vector 20μg G6591 39,000 Mammalian Lysis Buffer 40ml G9381 9,000 Protease Inhibitor Cocktail 1ml G6521 14,000 * 沈殿状態のレジン容量（懸濁した場合の総ボリュームは 4 倍量） ※リガンド購入における注意点：HaloTag® Technology で使用するリガンドをプロメ ガ以外で作製・入手する場合、または研究用途以外でご使用される場合、ライセンス 契約の必要があります。詳細については弊社までご連絡ください。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） His タグ関連製品（つづき） His タグタンパク質精製用担体（レジン） HisLink TM Protein Purification Resin 50ml V8821 44,000 5ml V8823 5,000 GST タグ関連製品 GST タグタンパク質精製キット（磁性体粒子） MagneGST TM Protein Purification System 40 回分 V8600 24,000 200 回分 V8603 80,000 GST タグタンパク質精製用担体（磁性体粒子） MagneGST TM Glutathione Particles 4ml V8611 18,000 20ml V8612 65,000 GST タグタンパク質によるプルダウンキット MagneGST TM Pull-Down System 80 回分 V8870 90,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） His タグ関連製品 His タグタンパク質自動精製用キット（磁性体粒子） Maxwell ® 16 Polyhistidine Protein Purification Kit 48 回分 AS1060 38,400 His タグタンパク質精製キット（磁性体粒子） MagneHis TM Protein Purification System 65 回分 V8500 26,000 325 回分 V8550 90,000 His タグタンパク質精製用担体（磁性体粒子） MagneHis TM Ni-Particles 2ml V8560 19,000 10ml V8565 65,000 His タグタンパク質精製キット（磁性体粒子：ウサギ網状赤血球ライセートからの精製） MagZ TM Protein Purification System 30 回分 V8830 36,000 His タグタンパク質精製キット（レジン） HisLink TM Spin Protein Purification System 25 回分 V1320 27,000 HisLink TM 96 Protein Purification System 1 × 96 ウェル分 V3680 45,000 5 × 96 ウェル分 V3681 190,000 HaloTag® Mammalian Pull-Down System と免疫共沈降法によるプルダウンの比較 左図：HeLa 細胞で p65 の相互作用パートナーのプルダウンを行った後に電気泳動 - 銀染 色により検出し、HaloTag ® Mammalian Pull-Down System と免疫共沈降法を比較した。HaloTag ® Mammalian Pull-Down System では免疫共沈降法の約 4 ～ 5 倍の感度が得られた。左表：2 つの 方法により確認された p65 パートナー。予想される相互作用パートナーは質量分析により 確認した。 予想されるパートナー 免疫共沈降 HaloTag® p105 ○ ○ p100 ○ Rel A ○ ○ Rel B ○ C-Rel ○ IκBα ○ ○ IκBb ○ ○ IκBe ○ ○ HaloTag 免疫共沈降 ® p65 Ab No Ab p65-HT HT Cont テクニカルサービス ● Tel. 03-3669-7980 ／ Fax. 03-3669-7982 ● E-Mail : prometec@jp.promega.com 日本語 Web site：www.promega.co.jp プロメガ株式会社 本 社 〒103-0011 東京都中央区日本橋大伝馬町14-15 マツモトビル Tel. 03-3669-7981／Fax. 03-3669-7982 大阪事務所 〒532-0011 大阪市淀川区西中島6-8-8 花原第8ビル704号室 Tel. 06-6390-7051／Fax. 06-6390-7052 ※製品の仕様、価格については2011年9月現在のものであり予告なしに変更することがあります。 PK1109-03 販売店： タンパク質分析用プロテアーゼ（質量分析 ／アミノ酸配列分析） Protease プロテオーム研究サポート製品 定評のあるプロメガのトリプシンに加え、質量分析・アミノ酸配列分析用の各種プロテアーゼを揃えています。さらに酵素消 化効率を向上させる消化促進剤により確実なタンパク質同定が可能です。 製品名 切断部位 特長 カタログ番号 容量 価格 プロテアーゼ トリプシン Trypsin Gold Mass Spectrometry Grade Lys-C、Arg-C 質量分析グレード 特異性が向上し（TPCK 処理）、自己消化を 予防（リジンの還元メチル化）、質量分析で 品質管理 V5280 100μg ¥16,500 Sequencing Grade Modified Trypsin シークエンシンググレード 特異性が向上し（TPCK 処理）、自己消化を 予防（リジンの還元メチル化）。V5111 は凍 結乾燥粉末。V5113 は凍結溶液（0.5mg/ml : in 50mM acetic acid） V5111 5x20μg ¥13,000 V5113 5x20μg ¥6,500 Immobilized Trypsin 短時間消化 スピード消化（30 分間）。トリプシンがレジ ンに固定化されているので分解産物のみを回 収可能。 V9012 2ml (10 回分 ) ¥35,000 V9013 2 Ｘ 2ml (20 回分 ) ¥64,000 キモトリプシン Chymotrypsin, Sequencing Grade 芳香族アミノ酸 （Tyr, Phe, Trp）の C 末端 シークエンシンググレード ウシ膵臓由来のセリンエンドペプチダーゼ V1061 25μg ¥10,000 V1062 4x25μg ¥32,000 Lys-C rLys-C Mass Spec Grade Lys-C 質量分析グレード & シークエンシング グレード トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上 V1671 15μg ¥20,000 Endoproteinase Lys-C Sequencing Grade V1071 5μg ¥29,000 Asp-N Asp-N, Sequencing Grade Asp-N, Cys-N シークエンシンググレード トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上 V1621 2μg ¥20,000 Glu-C Glu-C, Sequencing Grade Glu-C, Asp-C シークエンシンググレード トリプシンとの組み合わせでシークエンス カバー率向上 V1651 5x10μg ¥29,000 消化促進 ProteaseMAXTM Surfactant, Trypsin Enhancer 質量分析グレード タンパク質分解効率およびゲル内消化後のペ プチド回収率が向上。1 時間で消化完了。適 応プロテアーゼ：トリプシン、キモトリプシン、 Lys-C、Glu-C（Asp-N については未試験だが消 化促進が予想される。） V2071 1mg ¥11,000 V2072 5x1mg ¥44,000