代謝物質をプレートリーダーで高速解析！ ページ2

RentaMax : ルミノメーター貸出しプログラム 本稿でご紹介した発光法によるエネルギー 代謝アッセイはルミノメーター（ルシフェラー ゼアッセイでおなじみ発光測定装置）で測 定することができます。ルミノメーターを利 用できない場合は弊社の GloMax ルミノメーターをお貸出しいたします（詳 細については www.promega.co.jp/rentamax/ をご覧ください）。プロメガ の試薬 & 検出装置の組み合わせで最適なアッセイパフォーマンスが得られ ます。詳細はお気軽にお問い合わせください。 マルチプレックスアッセイへの対応 分化誘導や化合物刺激の後に、細胞の代謝を調べたい場合、化合物処 理や分化誘導が細胞にダメージを与えてしまったり、生存性に影響を及 ぼしてしまい、アッセイ結果に影響が出てしまう事はありませんか？特 に図 3 のような分化誘導をおこなったサンプルや生体由来の細胞、未 分化な細胞といった貴重なサンプルには、出来る限り１つの実験で複数 のパラメーターが取得できる実験が望ましいのではないでしょうか？ プロメガではマルチプレックスアッセイ（同一のサンプルに対して、複 数パラメーターを取得するアッセイ）にて、より精度の高いデータを取 得する実験を推奨しており、様々な組み合わせの事例があります。 図 4 は細胞内のグルタミン酸量の測定と合わせて、生存細胞数と細胞 内 ATP 量を測定したアプリケーションです。まず、生細胞の還元能を 指標とした RealTime-Glo™アッセイまたは生細胞に特異的なプロテアー ゼ活性を測定する CellTiter-Fluor™ 蛍光アッセイで生細胞を測定しまし た。次に細胞ライセートを調製し、その一部を用いたグルタミン酸量 の測定や CellTiter-Glo® アッセイを用いて生細胞由来の ATP を 測定して います。貴重なサンプルでのアッセイにおいて余すところなくデータを 取得することができます。 最後に 図 2 や 4 の例のように、プロメガの発光アッセイではわずか数µ L のサン プルからでも測定を行う事が可能です。図 5 に各アッセイの測定レンジ を示しました。この発光アッセイ法は pico mol レベルからの検出が可能 であり、測定レンジも広いため従来の蛍光法では解釈が困難な実験結 果を明瞭に示すことができます。 この他、様々なアプリケーション例を開発中であり、iPS 細胞 由来の分 化細胞や分化誘導した脂肪様細胞、T 細胞の代謝活性評価なども行っ ています。詳細は弊社 Web サイトを参照いただくか、お気軽にお問い 合わせください。 図 4. グルタミン酸量の測定アッセイのマルチプレックス例 A549 細胞を各細胞数で well に播種し、生存細胞、細胞内グルタミン酸量、ATP 量の測 定を行った。 A. アッセイの概要と流れ B. 培地中での生細胞試験（青色のバー：RealTime-Glo™）と、蛍光法での生細胞試験 （オレンジ色のバー：CellTiter-Fluor™） C. 調製した細胞ライセートに含まれる ATP 量を CellTiter-Glo® 2.0 Assay にて測定（青色の バー：RealTime-Glo™）実施後の細胞（オレンジ色のバー：CellTiter-Fluor™）実施後の 細胞（グレーのバー：未処理の細胞） D. 調製した細胞ライセートに含まれるグルタミン酸量を Glutamate-Glo™ Assay にて測定 （上記と同様） Luminescence (CellTiter-Glo™) Cells per well C D 100,000 90,000 70,000 50,000 40,000 30,000 20,000 10,000 0 5,000 10,000 20,000 60,000 80,000 Cells per well 0 5,000 10,000 20,000 1,800,000 1,400,000 1,000,000 800,000 600,000 400,000 200,000 1,200,000 1,600,000 Luminescence (Glutamate-Glo™) A B Cells per well 0 5,000 10,000 20,000 3,500,000 2,500,000 1,500,000 1,000,000 500,000 2,000,000 3,000,000 0 12000 10000 6000 4000 2000 8000 Luminescence (RealTime-Glo™) Fluorescence (CellTiter-Fluor™) 培養上清での細胞生存性アッセイ 細胞ライセートの作成 細胞内のグルタミン酸の測定 ATPアッセイ 1 0.001 1000000 10000 100 10 1000 100000 S/N 0.1 10 1000 Lactate Glutamate Glucose Glutamine Metabolites, µM 測定サンプル 検出下限 直線性 S/B 比 Lactate 100nM（5pmol/50 µl） Up to 200 µM >240 Glucose 5nM（0.25pmol/50 µl） Up to 50 µM >1000 Glutamine 5nM（0.25pmol/50 µl） Up to 50 µM >1000 Glutamate 5nM（0.25pmol/50 µl） Up to 50 µM >500 キーポイント 簡 単 な 測 定プロトコル・高 価 な 機 器 不 要 Add to Measure の簡単なホモジニアスアッセイでルミノメーター で測定可能！ 頑強で高感度なアッセイ バックグラウンドの低い発光 測定で、幅広いレンジでの測定が可能！ 様々なサンプルでの応用例 培養細胞に加え、組織や体 液サンプルの例もあり。もちろんマルチプレックスアッセイ にも対応！ プロメガ　高次元細胞プロジェクト 検索 図 5. 乳酸・グルコース・グルタミン・グルタミン酸の測定レンジ 参考文献 ● Donna Leippe et al. J Biomol Screen 2016 Nov. 1087057116675612. ● A Cacace and P Sonveaux et al. Oncogene, 1–11., 2016 関連製品 Assay kit 測定用途 サイズ カタログ番号 価格（￥） Lactate-Glo™ Assay 乳酸量の測定（発光） 5 ml J5021 74,000 Glucose-Glo™ Assay グルコース量の測定（発光） 5 ml J6021 67,000 Glutamate-Glo™ Assay グルタミン酸量の測定（発光） 5 ml J7021 74,000 Glutamine/Glutamate-Glo™ Assay グルタミンとグルタミン酸量の測定（発光） 5 ml J8021 80,000 CellTiter-Glo®2.0 Assay 生細胞測定（ATP・発光） 10 ml（100 回分） G9241 15,000 CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay 生細胞測定（生プロテアーゼ・蛍光） 10 ml（100 回分） G6080 17,000 RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay 生細胞測定（還元能・発光） 100 回分 G9711 20,000 Glucose Uptake-Glo™ Assay グルコース取り込み能の測定（発光） 5 ml（50 回分） J1341 63,000 　　　　　　　　プロメガ のルミノメーターが最適 ! 超高感度 クロストークゼロ スーパーワイドダイナミックレンジ RentaMAX はプロメガのルミノメーター / 自動精製装置を無償で一定期間 お貸出しするプログラムで、試薬 / 機器の両面からのサポート・コンサル ティングも行います。 「機器がないから…」 大丈夫です、ご相談ください！ 代謝アッセイも 5Promega KAWARABAN