CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay Protocol

作成日： CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay Protocol INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS G7570, G7571, G7572, G7573 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-5614-6079 Revised 08/06 CellTiter-Glo® 試薬の調製 1.CellTiter-Glo® Buffer を室温で融解させる。 2.使用する前に CellTiter-Glo® Substrate を室温に平衡化する。 3.適切な量の CellTiter-Glo® Buffer(10ml または 100ml)を室温 に平衡化した CellTiter-Glo® Substrate のボトルへ添加す る。(この混合溶液が CellTiter-Glo® 試薬となります。) 4. ボトルを穏やかに攪拌して内容物を混合する。 (CellTiter-Glo® Substrate は 1 分間以内に溶解します。) CellTiter-Glo® 試薬調製後の保存条件および保存期間 試薬調製後の保存温度、 保存期間および 保存期間および試薬の活性 凍結融解と試薬の活性 -20℃, 21 週間 : ほぼ活性は維持される 4℃, 2 日間 : 活性は 5%低下 4℃, 4 日間 : 活性は 15%低下 室温, 2 日間 : 活性は 25%低下 室温, 4 日間 : 活性は 50%低下 5 回：活性は 3-5%低下 10 回：活性は 5-10%低下 アッセイプレートの アッセイプレートの調製 1.不透明（白色）のマルチプレートに培地を加えた培養細胞を 用意する。培養液量は 96 well plate では 100μl、384 well plate では 25μl とする。 注意：ルミノメーター ルミノメーター ルミノメーターに適用できるマルチプレート マルチプレート マルチプレートを使用してく ださい。 2.バックグラウンドの発光量を測定するために、細胞を含まな い培地だけのコントロールウェルを準備する。 3.試験を行う化合物を実験用ウェルに添加し、培養プロトコル にしたがって、インキュベートする。 4.室温に平衡化させるため、室温で約 30 分間プレートを静置 する。 5.各ウェルに培地と等量の CellTiter-Glo® 試薬を添加する。 6.細胞を溶解させるためにシェーカーで 2 分間攪拌する。 7.発光シグナルを安定化させるために、室温で 10 分間プレー トを静置する。 注意：マイクロプレートのエッジ効果や温度勾配などが原因で不 均一な発光シグナルを生じることがあります じることがあります じることがあります。CellTiter-Glo® 試 薬とサンプルは、必ず室温になっていることを になっていることを になっていることを確認してください。 8.発光シグナルを測定する。