CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay

技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980 www.promega.co.jp CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay を利用したモデルプロトコルです。 最新のマニュアルについては英語版(TB359)をご覧下さい < CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay 試薬の調製> 1. CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay キットの構成品を 37℃ウォーターバス中で溶解する。溶解した ら、数回、転倒混和し、試薬を混ぜる。 2. Assay Buffer 全量を AAF-Glo™ Substrate のボトルに移し、転倒混和を行い、よく混ぜる。これを CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay Reagent とする。 ＊option:プロトコルに合わせて、下記の試薬を調製します。 Lysis Reagent の調製： Digitonin(型番 G9290 と G9291 の場合は 33ul, G9292 の場合は 162ul)を Assay Buffer に加える(型番 G9290 と G9291 の場合は 5ml, G9292 の場合は 25ml)。転倒混和などでよく混ぜ、これを Lysis Reagent とする。 ＊＊CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay Reagent と Lysis Reagent は 4℃で 7 日間保存が可能です。 長期での保存の場合、CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay Reagent は、-70℃で 4 ヶ月保存が可能です。 複数回の凍結融解は推奨しません。このため、-70℃で保存する場合には、使用量に合わせて小分けに分 注して保存してください。 < CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay プロトコル(簡易モデルプロトコル)> 1．細胞培養用の 96well 白プレートに、任意の細胞数にて 100uL で細胞を播種する。 2. 任意の期間培養する。また、化合物等の処理を行う。 3. CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay Reagent を準備する。凍結保存した試薬の場合には、室温に戻っ ていること、十分に溶解されている事を確認し、使用前にタッピング等で軽く混和する。 4．CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay Reagent 50uL を各 well に添加する。 5. プレートシェーカーにてよく撹拌し、室温で 15 分インキュベーションする。 6. 発光測定を行う。 7. option：well 中のトータルの細胞の発光を測定する場合。 Lysis Reagent 50uL を各 well に添加する。 プレートシェーカーにてよく撹拌し、室温で 15 分インキュベーションし、発光測定を行う。 (補足情報) ・アッセイを実施する前に、測定できる細胞数の予備検討を推奨します。 ・上記の 6.と 7.で求めた発光値から、生存細胞の発光シグナルを算出することも可能です。 生細胞のシグナルの算出方法は下記になります。 Viable cell luminescence = Total luminescence(7.で測定したシグナル) – Experimental dead cell luminescence（6.で測定したシグナル） ・発光シグナルは 15 分から 1 時間内にプラトーとなり、最大 5 時間まで測定が可能です。 CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS G9290, G9291 AND G9292.