最強タグ HiBiT

最強タグ　HiBiT 細胞を紐解くための、次世代タンパク質解析タグ HiBiT導入のための３つのアイテム ・ウェビナー ・クイックスタートガイド ・プレートリーダーレンタルプログラム ノックイン細胞も利用可能! 18448MA FITC-A 101 10 2 103 104 10 5 HeLa Parental CASP3-HiBiT HDAC6-HiBiT HDAC2-HiBiT EGFR-HiBiT CFL1-HiBiT 抗体検出能 （WB, IP） 細胞ベース アッセイ HiBiT タグ 高感度簡便& 高感度 従来のエピトープタグ （FLAG®, Myc, HA など） 最強タグ HiBiT 細胞を紐解くための、 次世代タンパク質解析タグ HiBiT タグ HiBiT導入のための３つのアイテム 従来のエピトープタグ ひとつのタグで 標的タンパク質を 全方向解析！ 初めウてェ割ビナー クイックスタート ガイド 4 ページ 2 ページ 2 ページ プレートリーダー レンタルプログラム ノックイン細胞も利用可能!　　 4 ページ プロメガ株式会社 細胞アッセイ ・イメージング まで In Vitro 実験から CRISPR でHiBiT ノックインした細胞を用いたプル ダウンの効率比較 HiBiT-FLAG® をHSP90B1 の内在ローカスに CIRISPR ゲノム編集でノックインし、各エピトープ抗体 を用いてプルダウンを行った。 CRISPR でHiBiT ノックインしたHeLa 細胞の抗HiBiT 抗体の蛍光免疫細胞染色像 HiBiT タグを付加した内在レベルの各標的タンパク質、SMARCA4 （核フィブリル; クローン細胞：左図）、 VCL （局所接着、膜、細胞骨格; プール細胞：右図）をAnti-HiBiT mAb　を用いた免疫蛍光染色（赤）およ び核をHoechst 染色（青）で検出した。 FLAG® はSigma-Aldrich（Merck）社の登録商標です。 Anti-HiBiT Monoclonal Antibody を用いたウェスタンブロット検出とFLAG® タグ抗体との比較 HeLa 細胞において HSP90B1 にHiBiT ＋FLAG® タグをC 末端に内在的にタグ付けした。細胞プールのライ セート（10   g）をSDS-PAGE で分離し、PVDF 膜に転写後、1μg/ml Anti-HiBiT または 10μg/ml Anti- FLAG® 一次抗体および二次抗体、ECL 基質を用いてウェスタンブロッティングを実施した。 ●蛍光免疫細胞染色 ●プルダウン ●ウエスタンブロッティング 抗体による免疫検出法 · ウエスタンブロッティング · プルダウンアッセイ · FACS · 細胞蛍光免疫染色 　 · 精製 抗体で 見る クイックスタート ガイド プレートリーダー レンタルプログラム HiBiT 付加 標的タンパク質 HiBiT ウェビナーでは上記のタンパク質解析アプリケーションに加え、エクソソーム・これからのタグ HiBiTタグによる タンパク質 全エピトープ タグとして 生化学& in vitro 実験 にも！ ・Anti-HiBiT mAb 　　抗 HiBiT 抗体 上清残存タンパク質 （薄い方が良） 溶出タンパク質 （濃い方が良） クローン細胞プール細胞 HSP90B1-HiBiT-FLAG HSP90B1-HiBiT-FLAG Anti-HiBiT Monoclonal Antibody Anti-FLAG® (M2) Antibody Parental Parental 148 98 64 50 36 kDa 148 98 64 50 36 kDa 製品情報は4 ページ参照 高感度 HiBiT と LgBiT の特異的 な結合により発光酵素活性 が再生。フリマジン添加に より発光。 酵素断片相補アッセイ法 · 細胞内タンパク質の定量 · 細胞外タンパク質 ( 受容体、分泌タンパク質) の定量 · 発光ブロッティング · リアルタイム細胞アッセイ & イメージング ●トータルタンパク質定量 ●細胞内タンパク質の経時的定量 1 10 100 Normalized Luminescence (RLU) 50ng CMV/HIF1A -HiBiT 5ng CMV/HIF1A -HiBiT 0.5ng CMV/HIF1A -HiBiT 0.05ng CMV/HIF1A -HiBiT 5ng PGK/HIF1A -HiBiT Endogenous HIF1A -HiBiT clone Log 10[1,10 -phenanthroline], M 0 –7 –6 –5 発現法による分解抑制誘導の応答性の違い HeLa 細胞に CMV または PGK プロモーターを含む HIF1A-HiBiT 発現コンストラクトを一過的にトランスフェク ションまたは CRISPR/Cas9 により内在ローカスに HiBiT を導入し、1,10- フェナントロリンによる応答性を調べた。 PROTAC 処理後の 内在性 HiBiT-BRD4 の 分解カイネティクス HEK293 LgBiT Cell Line の 内在 BRD4 遺伝子座にHiBiT を挿入した。Nano-Glo® Endurazine™ substrate を含 むCO2 非依存性培地中で様々 な濃度のMZ1 で細胞を処理し た。発光は GloMax® Discover マイクロプレートリーダーでリア ルタイムに測定した。 タンパク質分解 誘導剤添加による HiBiT タグタンパク質の 分解イメージング HiBiT タグ付きGSPT1 を内在 発現するHEK293 細胞（LgBiT を安定発現）をCC-885 デグ レーダーで処理した。その後、 Nano-Glo® Vivazine™ を添加 し、5 時間にわたりGloMax® Galaxy（詳細については別途 お問合わせ下さい）でイメージ を撮影した。 0 5 10 15 20 25 0 0.5 1.0 Time (hours) Fractional Luminescence (RLU) 1 0.333333 0.133333 0.053333 0.021333 0.008533 0.003413 0 MZ1 μM 発光で 測る・見る ・HiBiT 融合用ベクター ・PCR によるHiBiT 配列導入 ・CRISPR ノックイン ※ 発光測定装置の無償レンタル サービスについては弊社まで お問合せください。 HiBiT NanoLuc® 発光酵素由来の 小断片［11 アミノ酸］ ・HiBiT ベクター ・Lytic Detection System ・Extracellular Detection System ・Blotting System　ほか その他の HiBiT 検出試薬 ・ウイルス感染アプリケーションなどもご紹介いたします（動画QR コードは4 ページ参照）。 は HiBiT 一択！！ 方位解析アプリケーション 発光タグとして 細胞実験 （アッセイ、イメージング） & スクリ―二ング に最適 細胞 イメージャー NEW 発光細胞 イメージングも！ LgBiT を 試薬として供給 cell LgBiT を 細胞内で発現 LgBiT NanoLuc® 発光酵素由来の大断片 製品情報は4 ページ参照 製品情報は4 ページ参照 0 hr 5 hr 100nM CC – 885 最強タグ HiBiT ウェビナーシリーズ CRISPRゲノム編集法により内在遺伝子ローカスにHiBiTを ノックインした細胞株をご利用いただけます ! 細胞リスト（PDF）についてはQR コードよりご確認ください。 基礎編 テクノロジー概要とアプリケーション 抗 HiBiT 抗体登場! タンパク質解析アプリケーション完成 応用編 1 細胞内での真の挙動を追跡できる タンパク質解析ツール 応用編 2 エクソソームから細胞融合、標的細胞死 最新アプリケーションまで 応用編 3 最強タグHiBiT をはじめよう! 製品名カタログ番号サイズ定価（¥） HiBiT 検出試薬 Nano-Glo® HiBiT Lytic Detection System N3030 10 ml 35,000 N3040 100ml 190,000 Nano-Glo® HiBiT Extracell Detection System N2420 10 ml 38,000 N2421 100 ml 230,000 Nano-Glo® HiBiT Blotting System N2410 100 ml 47,000 NanoLuc® 検出試薬 Nano-Glo® Live Cell Assay System N2011 100 回分36,000 N2012 1,000 回分231,000 Nano-Glo® Endurazine™ Live Cell Substrate N2570 0.1 ml 39,000 Nano-Glo® Vivazine™ Live Cell Substrate N2580 0.1 ml 39,000 Nano-Glo® Extended Live Cell Substrate Trial N2590 0.2 ml 50,000 製品名カタログ番号サイズ定価（¥） 抗体 & コントロールタンパク質 Anti-HiBiT Monoclonal Antibody N7200 100 μg 86,000 N7210 5 x 100 μg 400,000 Anti-LgBiT Monoclonal Antibody N7100 100 μg 73,000 HiBiT Control Protein N3010 100 μl 45,000 ベクター pBiT3.1-N [CMV/HiBiT/Blast] Vector N2361 20 μg 92,000 pBiT3.1-C [CMV/HiBiT/Blast] Vector N2371 20 μg 92,000 pBiT3.1-secN [CMV/HiBiT/Blast] Vector N2381 20 μg 92,000 pFC37K HiBiT CMV-neo Flexi® Vector N2391 20 μg 92,000 pFN38K HiBiT CMV-neo Flexi® Vector N2401 20 μg 92,000 pFN39K secHiBiT CMV-neo Flexi® Vector N2411 20 μg 92,000 LgBiT Expression Vector N2681 20 μg 102,000 ViaScript™ LgBiT mRNA Delivery System NE1130 10 プレート分55,000 製品案内 テクニカルサービス ● Tel. 03-3669-7980　● E-Mail : prometec@jp.promega.com