Maxwell® 16 DNA Purification Kits Protocol

作成日： 注意： この日本語マニュアルは製品に添付される英文マニュアルを翻訳したもの ですが、常に更新されるものではありません。最新の英文マニュアルについ ては以下のサイトよりご覧ください。 Maxwell® 16 DNA Purification Kits Protocol INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS AS1010, AS1020, AS1030 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 Revised 8/07 Maxwell® 16 DNA Purification Kitsは、Maxwell® 16 Instrument (カタログ番号 AS1000)を用いて、簡単に 効率よくゲノムDNAを精製できます。 このシステムを用いて回収したDNA量は表1のとおりになります。 表1 Maxwell® 16 Genomic DNA Purification Kitによる回収量 サンプルの種類 サイズ 標準収量 純度 (A260/A280) 200µl 6µg 1.8 全血* 400µl 11µg 1.8 250µl 24µg 1.9 バフィーコート 500µl 48µg 1.9 CHO cells 5×106 cells 11µg 1.8 HeLa cells 5×106 cells 17µg 1.8 E.coli BL21（DE3)(グラム陰性菌) 2×109 cells 26µg 2.0 B. cereus (グラム陽性菌) 2×109 cells 20µg 1.6 マウス肝臓 25mg 96µg 1.9 マウス尾 1.2cm 18µg 1.8 注意 ： このシステムを使用する際は、サンプルの種類に応じて使用するキットを選択します。 また、サンプルの性状によっては、適当な前処理が必要な場合もあります。 サンプルの種類 ： 全血 使用キット ： Blood DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1010) サンプル量 ： 50～400µl 前処理 ： 不要 備考 ： 全血の量および白血球数により収量は変化します。最大400µlの全血を処理することが可能であり、これは一般的に約4 × 106 個の白血球に相当します。過剰量のサンプルを処理した場合、収量および精製度が低下することがありますのでご注意 ください。 サンプルの種類 ： バフィーコート 使用キット ： Blood DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1010) サンプル量 ： 250µl (全血2.5mlから調製) ～ 500µl (全血5mlから調製) 前処理 ：下記参照 1. 採血管(EDTAやヘパリン処理)を2,000 × gで20分間の遠心を行う。 2. 1mlのピペッターで白血球を回収する。 3. 回収した白血球をカートリッジのウエル＃1に加える。 備考 ： 250µlまでのバフィーコート(2.5mlの全血から調製)の一般的な収量は20～30µgであり、A260/A280の比は 1.7以上が得られます。約5mlの全血から得られる500µlまでのバッフィーコートでは、70µgの収量が得られま す。一般的に、収量は血液中の白血球数に依存します。 注意: ○ Elution Bufferは次の量で準備してください。250µlのバフィーコートを処理する場合、300µlのElution Buffer を準備する。251～500µlのバフィーコートでは600µlのElution Bufferを準備する。 ○ Elution Bufferは、蒸発とMagneSil PMPsへの吸収により、精製工程の終了時には準備した液量から約 150µlの減少が見られます。 Maxwell® 16 DNA Purification Kits Protocol INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS AS1010, AS1020, AS1030 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 Revised 8/07 サンプルの種類 ： 動物培養細胞 使用キット ： Cell DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1020) サンプル量 ： 5 × 106 cellsまで 前処理 ： 不要 備考 ： サンプルは最大400µlの培地またはPBSに懸濁する。 サンプルの種類 ： グラム陰性菌 使用キット ： Cell DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1020) サンプル量 ： 2 × 109 cellsまで 前処理 ： 不要 備考 ： サンプルは最大400µlの培地またはPBSに懸濁する。 サンプルの種類 ： グラム陽性菌 使用キット ： Cell DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1020) サンプル量 ： 2 × 109 cellsまで 前処理 ： 下記参照 1. 遠心操作で細胞ペレットを準備する。 2. 400µl TEで細胞のペレットを懸濁する。 3. 100µl lysozyme (25mg/ml)を加える。 4. 37℃で2時間のインキュベーションを行う。 5. インキュベーション後、全量をカートリッジのウエル＃1に加える。 サンプルの種類 ： 動物組織 ・ マウス尾 使用キット ： Tissue DNA Purification Kit (カタログ番号 AS1030) サンプル量 ： 50mgまで 前処理 ： 不要 備考 ： 過剰量のサンプルでは、収量および精製度の低下につながります。また、最大収量を得るためには、 0.5cm以上のマウス尾は、さらに半分にカットすることをお薦めします。 Maxwell® 16 DNA Purification Kits Protocol INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS AS1050 Quick PROTOCOL 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 Revised 8/07 Maxwell® 16 (カタログ番号 AS1000)によるGenomic DNA 精製 手前(ドア)側 奥側 1. カートリッジの密閉シー ルをはがす。 2. それぞれのカートリッ ジのウエル番号 7 に プランジャーを挿入 し、ウエル番号 1 に サンプルを加える。 注意 ： プランジャーの向きにご注意ください。 4. Maxwell® 16 の電源を ON にし、 Research Mode (Rsch) を確認す る。 5. “Run” を選択して、 【 Run/Stop 】ボタンを押 す。 6. “DNA” を選択して、 【Run/Stop】ボタンを押 す。 8. 適切なプロトコールが選択 されていることを確認し て、【Run/Stop】ボタンを押 す。 9. ドアを開けて、【Run/Stop】 ボタンを押す。 10. カートリッジを Maxwell® 16 のトレイに 移 す 。 Elution Tube を Maxwell® 16 の elution tube slot に差し込 む。 11. 【Run/Stop】ボタンを押し、 ドアを閉める。 12. Maxwell® 16 が精製工 程を開始する。 13. 精製工程の終了後、ドアを開けて、ロッドにぶ ら下がっているプランジャーがあれば落とす。 【Run/Stop】ボタンを押す。 14. Elution Tube を Magnetic Elution Tube Rack に移 し、溶出された DNA を保存 容器に移す。 7. サンプルに応じたプロト コールを選択して、 【Run/Stop】ボタンを押 す。 3. 青色の Elution Tube に 300µ の Elution Buffer を加える (バフィーコートでの Elution Buffer の 量は前記を参照)。