Maxwell® RSC Fecal Microbiome DNA Kit

pg. 1 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 Maxwell® RSC Fecal Microbiome DNA Kit (カタログ番号 AS1700) 簡易マニュアル ご用意いただくもの • ボルテックスミキサー • ピペットマン (P-20、P-200、P-1000)とそれらのチップ • 95℃に設定したヒートブロックインキュベーター • 56℃に設定したヒートブロックインキュベーター サンプルの調製手順 1. 100~300mgの糞便を2ml遠心チューブに移す。 2. 1ml Lysis Bufferと40μl Proteinase K Solutionを加え、30秒間のボルテックスにより十分に 撹拌する。 3. 95℃のヒートブロックで、5分間のインキュベーションを行う。 4. ヒートブロックから取り出し、室温において、2分間のクールダウンを行う。 5. 1分間のボルテックスにより完全に撹拌する。 6. 56℃のヒートブロックで、5分間のインキュベーションを行う。 7. このインキュベーションの間に、次ページの「カートリッジの準備」を行う。 8. インキュベーション後、最高速度 (> 10,000 ×g)で室温、5分間の遠心を行う。 次のページに続く pg. 2 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 カートリッジの準備と精製工程 1. 検体数分のカートリッジをMaxwell® RSC/CSC Deck Trayに立て、順にそのアルミシールを剥 がす。 カートリッジの両端がカチッというまで、しっかりとセットする 注意：サンプル数が16より少ない場合には、Trayに左右バランスよく置いてください。 2. 同数のElution Tubeをセットし、100μlのElution Bufferを加える。 Elution Tubeはグッと強く一番下まで押し込んでください。 Elution Bufferの量を減らした場合、磁性ビーズの持ち込みの割合が高くなることが予想されるた め、標準として100μl Elution Bufferでの溶出をお勧めします。 また、Elution Tubeのフタは絶対に閉めないでください。 3. カートリッジのウエル8に、プランジャーを置く。 4. 300μlのBinding Bufferを同じくカートリッジのウエル#1に加 える。 ウエル1は最も大きなウエルです。カートリッジラベルに一番近 く、Elution tubeからは最も遠い位置にあります。 5. 20μlのRNase Aをカートリッジのウエル#3に加える。 7. 遠心後の上澄みから300μlだけを取って、カートリッジのウエル#1に加える。 数回のピペッティングにより撹拌してください。 遠心チューブの底にある固形物は入れないようにしてください。 8. Maxwell® RSC/CSC Deck TrayをMaxwell® RSC Instrument本体にセットし、精製操作をス タートする。 精製終了後 1. Maxwell® RSC/CSC Deck Trayを取り出す。Elution Tubeのフタを閉め、適切に保管する。 磁性体ビーズの混入がみられた場合、10,000×gで2分間の遠心操作により除くことができます。 2. カートリッジおよびプランジャーを廃棄する。