Maxwell® RSC FFPE Plus DNA Kit

技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 Maxwell® RSC FFPE Plus DNA Kit (カタログ番号 AS1720) 簡易マニュアル ご用意いただくもの ⚫ 1.5ml遠心チューブ ⚫ 70℃設定のヒートブロック ⚫ ボルテックスミキサー ⚫ 微量高速遠心機 ⚫ ピペットマン(P-20、P-200、P-1000)とそれらのピペットチップ 試薬の調製、およびカートリッジの用意 Proteinase K Solution (ストック用)の調製 1. 500μlのNuclease-Free Waterを凍結乾燥品のProteinase Kに加える。 溶解したProteinase K溶液は20μg/μlになります。 溶解後は、小分けして-20℃保存していただければ、2年程度は安定して保存できます。 5回の凍結・融解を行っても、顕著な活性低下は認められません。 使用前、Proteinase Kは氷上で融解および保管してください。 サンプルの前処理のプロトコール 1. FFPE切片をサンプルチューブに移す。 ※ FFPEは、トータルで2mm3まで(5~10μm厚で、20~200mm2のサイズ)を使うことができます。 ※ スライドガラスに貼り付けている切片を利用する場合には、スライドガラスから清浄なカミソリでそぎ落と してください。FFEPE切片は、タッピングや遠心によりサンプルチューブの底に落としてください。 ※ パラフィンの量が多い場合、手順4および5の時点で再凝固する場合があります。上記のように、パラフィン をそぎ落とす、または、ミネラルオイルで脱パラフィン処理を行うなど、パラフィン量を減らす前処理を加 えてください。 2. 遠心により、サンプルをチューブの底に集める。20μlのProteinase K Solutionと180μlのIncubation Bufferを加える。 この時点で、FFPE全体がProteinase K反応液に浸らないこともあり得ます。 3. キャップを閉め、70℃で1時間からオーバーナイトでインキュベーションする。 4. ヒートブロックから取り出し、400μlのLysis Bufferを加え、短時間のボルテックスにより撹拌する。 5. Maxwell® RSC Instrumentでの処理まで、室温にて保管しておく。 処理後のサンプルは冷蔵および冷凍で保管せず、室温にて保管してください。 技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 カートリッジの準備 1. 検体数分のカートリッジをMaxwell® RSC/CSC Deck Tray に立て、順にそのアルミシールを剥がす。 カートリッジの両端がカチッというまで、しっかりとセットする 注意：カートリッジの側部に鋭利な箇所がありますので、取扱いには十分ご注意ください。 注意：サンプル数が16より少ない場合には、Maxwell® RSC/CSC Deck Trayの中央部分をお使いください。 2. 同数のElution Tubeをセットし、50μlのNuclease-Free Waterを加える。 Elution Tubeを差し込む穴は、固定するため、挿入には少し押さえる必要があります。Elution Tubeは一番下ま でグッと強く押し込んでください。 また、Elution Tubeのフタは絶対に閉めないでください。 3. カートリッジのウエル8に、プランジャーを置く。 4. 全量(約600μl)のライゼートをカートリッジのウェル1に添加 する。 ウェル1は最も大きなウエルです。カートリッジラベルに一番 近く、Elution tubeからは最も遠い位置にあります。 5. Maxwell RSC Instrumentを起動し、STARTから『FFPE Plus DNA／AS1720』を選択する。 6. Maxwell® RSC/CSC Deck Trayを、Maxwell® RSC本体にセットし、精製操作をスタートする。 精製終了後の操作 1. Maxwell RSC® Instrumentのドアを開け、Elution Tubeのフタを閉める。 2. Maxwell® RSC/CSC Deck Trayを取り出し、Elution Tubeを適切に保管する。 3. Maxwell RSC® Instrumentのドアを閉める。カートリッジとプランジャーを廃棄する。