核酸精製

核酸精製

Nucleic Acid Purification ガイド

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Contents： •プラスミド （Wizard® & PureYieldTM） •PCR産物 •ゲノムDNA •Total RNA Nucleic Acid Purification ガイド 吸引法で核酸精製をスピードアップ 3× 2 Vacuum メンブレンテクノロジーと吸引法 マルチプレックス分析やリアルタイム PCR など新しい核酸分析法が汎用されるようになりより純度の高い DNA/RNA を迅速に調製す る必要性を生じています。スタートサンプルとしてクオリティーの高い核酸を確実に得ることは実験計画をスムーズに運ぶための重要 な要素です。プロメガの核酸精製システムはこれまでに様々な分子生物学的アプリケーションに使用されてきた実績があり、その品質 の高さと使いやすさは世界中で認められています。シリカメンブレンと吸引処理法（または遠心）を採用したシンプルなプロトコルに より大幅に核酸の調製時間を削減することができます。 メンブレンテクノロジーを採用したシングルカラム（ミニ＆ラージ）、96 ウェルプレートの各フォーマットは、処理量や処理数に応じ てお選び頂け、同様の精製クオリティーを共有することができます。カオトロビックな条件下で核酸を選択的に捕捉するシリカの特性 を活かした多孔性シリカメンブレンを共通の担体として利用し、試薬の組成 / プロトコルにより精製するターゲットを変えるプロメガ 独自の核酸精製技術です。このメンブレンベースのシステムは、優れた洗浄効率、乾燥特性、迅速な操作性などシリカレジンを超える いくつもの特性を持っています。プロメガでは、これらのメンブレンと最適化された試薬を組み合わせることにより、様々なソースか ら特定の核酸を精製することができます。Wizard® および PureYieldTM ともに遠心法と吸引法により核酸の洗浄操作を行えますが、簡便 な吸引法を利用することにより煩雑な遠心機の操作や待ち時間を省略することができます。 吸引法の特長 • ハイスピードな核酸精製 例）PureYieldTM Plasmid Maxiprep System なら 約 1 時間で最大 1mg のプラスミドを精製可能 • 吸引マニホールド Vac-Man® で 20/96 サンプルを 1 度に精製 • 洗浄ステップが大幅に簡略化 （煩わしい遠心操作の繰り返しを低減） • プラスミド、PCR 産物、ゲノム DNA、 Total RNA の各種キットを用意 Vac-Man® 96 洗浄廃液はマニホールド外の吸引トラップに排出されるため、 精製中にマニホールドを分解する必要がありません。 PureYieldTM Midi と他社製品の操作時間の比較（動画） www.promega.com/multimedia/17483/17483.html 吸引法の簡便性 遠心法による洗浄ステップでは遠心操作を繰り返すため (Wizard® SV minipreps の場合 3 回）、各ミニカラム / チューブを遠心機にセットし、遠心後に洗浄廃液を捨てる作業 も同様に繰り返す必要があります。それに対して吸引法では吸引マニホールドにカラ ムを一度 セットすれば面倒な洗浄廃液除去工程である煩雑なミニカラム / チューブの 付け替えを繰り返す必要がありません 。 * ライセート清澄化後 は吸引のみで完結。 簡便で収量も Up ! 遠心機のみを利用した 操作法 吸引法と遠心法の操作概要 * 菌体量が多い場合は遠心による清澄化が必要です。 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 500 400 300 200 100 0 µg µg/µl 7635M 250 350 B Elution Volume 450 PureYieldTM Plasmid Midiprep Yield and Recovery 50ml cultures with high copy # plasmid 600 EluatorTM concentration Standard concentration EluatorTM yield Standard yield Acheive high yields & concentration 350 3 Nucleic Acid Purification ガイド Eluator TM による吸引法：遠心操作にかかる時間を削減し、簡便に大量 のプラスミドを調製（Plasmid Midi & Maxi） Eluator TM Vacuum Elution Device は PureYieldTM Midi & Maxi System における溶出操作を吸引法で行うためのデバイスです。これ までの吸引法でも最後の溶出は遠心操作を伴っていましたが、Eluator TM を用いれば吸引により 1.5ml チューブへ核酸を溶出さ せることができるため、クリアライセ－ト調製後の操作を一貫して吸引法で行うことができます。これにより、複数回の遠心 分離で浪費されていた時間（2-3 時間）を短縮することができます。また、収量増加も期待できます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Vac-Man ® Laboratory Vacuum Manifold, 20-sample capacity 1 セット A7231 45,000 One-Way Luer Lok ® Stopcocks 10 個 A7261 3,000 Eluator TM Vacuum Elution Device 4 個 A1071 20,000 Vacuum Adaptors 20 個 A1331 2,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Vac-Man ® 96 Vacuum Manifold 1 セット A2291 60,000 Collar for Vac-Man ® 96 Vacuum Manifold 1 個 A2311 20,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/vacman.html 標準法と Eluator TM を用いた吸引法との収量および濃度の比較 PureYieldTM Midiprep を用いて一昼夜菌体培養液（ハイコピープラスミド） 50ml からプラスミドを精製した際の収量比較。標準法は遠心による溶出 を行った。Eluator TM Vacuum Elution Device を用いれば、1.5ml チューブ に直接溶出が可能です。 Eluator™ Vac-Man® Yield of pGEM®-3Z Vector (µg) 14 12 10 8 6 4 2 0 7540MB 0.6ml 1.5ml Culture Volume Processed Miniprep 3.0ml 100,000 10,000 1,000 100 Luminescence (RLU) Competitor Miniprep PureYield™ Miniprep Control Plasmid 通常グレード トランスフェクショングレード ▲ ▲ 4 ミニプレップシステム（トランスフェクショングレード） PureYield™ Minipreps System ミディ＆マキシプレップシステム （トランスフェクショングレード） PureYield™ Midipreps & Maxipreps System ・スピードアップ :10 分でプラスミドを精製 ・高純度 : トランスフェクショングレードのプラスミドを精製 ・信頼の結果 : 溶解、中和ステップが指示薬により視認可能 ・柔軟 : 吸引法、遠心法が選べます。 ・収量 :15µg プラスミド 本製品は高純度なプラスミド DNA を迅速に精製するためのシス テムです。このシステムでは 600µl から 3ml の菌体培養液から最 大 15µg のプラスミド DNA を精製することができ、10 分で操作 を完了することができます。プラスミドからタンパク質、RNA、 エンドトキシンを除去するためにデザインされたユニークな Endotoxin Removal Wash が組み込まれています。トランスフェ クションや in vitro 転写 / 翻訳など繊細なアプリケーションにも適 応します。イソプロパノール沈殿や多くの遠心操作が無く、簡便、 迅速に精製することができます。このシステムは吸引法または遠 心法で操作することができます。 ・再現性の向上：吸引法による簡便で効率的な精製 ・高純度：トランスフェクショングレードのプラスミド精製 ・簡便：重力落下カラムやアルコール沈殿処理が不要 ・柔軟性：新規なメンブレンにより大量のプラスミドを精製 ・収量：Midiprep:100 ～ 200µg プラスミド DNA Maxiprep:1mg プラスミド DNA トランスフェクショングレードのプラスミド DNA を精製するた めにデザインされています。プラスミド DNA は 30 分以内に精製 することができ、シリカ – レジンやその他のメンブレンカラム法 に較べ所要時間が飛躍的に短縮化されます。 大部分のタンパク質、RNA、エンドトキシン混入物を除去するた めのユニークな Endotoxin Removal Wash が組合されており、ト ランスフェクション、in vitro転写/翻訳 など繊細なアプリケーショ ンへの適応性が向上します。精製プラスミドのイソプロパノール 沈殿や高速遠心を用いない迅速な精製が行え、プラスミドの高濃 度溶出も可能です。Eluator TM を用いれば溶出も吸引で行えます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） PureYield ™ Plasmid Miniprep System 100 回分 A1223 22,000 250 回分 A1222 48,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/pureyieldmini.html ※吸引で処理する場合マニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） PureYield ™ Plasmid Midiprep System 25 回分 A2492 27,000 100 回分 A2495 96,000 300 回分 A2496 お問合せ下さい プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/pureyield.html 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） PureYield ™ Plasmid Maxiprep System 10 回分 A2392 25,000 25 回分 A2393 58,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/pureyieldmaxi.html ※本製品にはスイングローターの遠心機が必要です。 また、吸引で行う場合はマニホールド、Eluator TM が別途必要です（3 ページ参照）。 指示薬により不完全な溶解・中和を防ぎます 各ステップを色で目視できるため確実な精製が行えます 菌体培養液量にともなうプラスミドの収量 トランスフェクション効率の比較 CHO細胞にトランスフェクションしたpGL4より発現した ホタルルシフェラーゼ活性を比較 PureYield™ MaxiprepとMidiprep Systemの収量比較 phMGFPプラスミドを含むJM109 培養液より精製した。Midiprep標 準吸引法、Midiprep改変法（ライセートクリアリングを変更）、 Maxiprep標準法で行った（Midiprep標準吸引法では50ml菌体培養液 からの精製を推奨）。 0 5816MB 200 400 600 800 1000 1200 50ml 100ml 150ml 200ml 250ml Bacterial Culture (ml) Plasmid Amount (µg) Standard Midi Alternative Midi Standard Maxi プラスミド精製 5 Nucleic Acid Purification ガイド ミニプレップシステム Wizard® SV Minipreps System 96ウェルミニプレップシステム Wizard® SV 96 Minipreps System ･ 柔軟性：手動と自動のどちらにも順応 ･ 迅速：60 分以内に操作完了 ･ 新しいプレートのデザイン：プレートの溶出ノズルを長く、 口径を大きくすることにより、溶出液の飛沫が最小限 ･ 汎用性：蛍光シークエンシングをはじめ一般的な分子生物学実験に最適 この製品は 60 分以内に 96 個のサンプルからプラスミドを同時に 精製するシステムです。精製操作は手動でも自動（ロボット）で も行えます。精製されたプラスミドは自動蛍光シークエンシング をはじめ、その他の分子生物学実験に最適です。 ･ 高収量：1 ～ 20µg DNA ･ 迅速：20 個を 45 分以内に精製 ・簡便：有機溶媒を用いた抽出操作が不要 ･ 柔軟性：遠心法と吸引法を選択可能 ･ ユニーク：アルカリプロテアーゼにより EndA+ 大腸菌からの精製も可能 ･ アプリケーション：蛍光シークエンシングを含む分子生物学実験に使用可能 本システムは、遠心法と吸引法のどちらでもプラスミド精製を行 える画期的なシステムです。カラムと一体になったシリカメンブ レンに DNA が吸着されることを利用しています。遠心法は、一 般的なマイクロ遠心機を用いて DNA を精製する方法です。吸引 法は、吸引装置 ( ポンプなど ) とマニホールド を利用し、減圧で 洗浄を行います。一般的な分子生物学の用途 ( 蛍光シークエンシ ングや制限酵素処理など ) に適応するプラスミド DNA を精製でき ます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® Plus SV Minipreps DNA Purification System 50 回分 A1330 11,000 Wizard ® Plus SV Minipreps DNA Purification System + Vacuum Adaptors 50 回分 A1340 12,000 Wizard ® Plus SV Minipreps DNA Purification System 250 回分 A1460 44,000 Wizard ® Plus SV Minipreps DNA Purification System + Vacuum Adaptors 250 回分 A1470 45,000 Wizard ® Plus SV Minipreps DNA Purification System 1000 回分 A1465 お問合せ下さい プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsvmini.html ※吸引で処理する場合はマニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV 96 Plasmid DNA Purification System 96 ウェル分 A2250 37,000 5×96 ウェル分 A2255 142,000 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV 96 Binding Plates 10 枚 A2271 110,000 Wizard ® SV 96 Lysate Clearing Plates 10 枚 A2241 80,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsv96pmd.html ※精製処理にはマニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 蛍光BigDye®ターミネーターシークエンシングの結果 各ロットごとに、精製したプラスミドの塩基配列が98%以上の 精度で500塩基以上解析できることをABI PRISM® 377 DNAシーク エンサーを用いて解析しています。 吸引法と遠心法における収量比較 手動による精製 自動化例 Culture Volume Spin Format Vacuum Format Plasmid DNA Yield(μg) 12 10 8 6 4 2 0 1ml 3ml 5ml 1ml 3ml 5ml 14 16 プラスミド精製 U U: Unpurified P: Purified 100bp 500bp 1,000bp 3,199bp M 3,000bp – 1,000bp – P U P U P U P 3789TA07_2A 100bp 200bp 300bp 500bp 1,000bp 3801TA08_2A M U P P U P U P U P U 6 ゲル抽出と PCR 産物精製システム Wizard® Gel & PCR System 96 ウェル PCR 産物精製システム Wizard® SV 96 PCR System ・オールインワン：ゲル精製、PCR 精製の両方が行えます。 ・任意の濃度で溶出可能：溶出液量 15µl でも 98％の回収率 ・柔軟性：遠心法と吸引法を選べます。 ・高い結合容量：最大 40µg ・高い回収率：70 ～ 95％ (100bp ～ 10kb) ・ゲル精製：標準または低融点アガロースゲル（TAE/TBE）から ・アプリケーション：精製した DNA は、自動蛍光シークエンシング、 クローニング、ラベリング、制限酵素消化、 in vitro 転写 / 翻訳にそのまま使用可能 ・操作時間：20 分以下 本製品は PCR 産物およびゲルスライスからの DNA 抽出を短時間・ 簡単に精製するためのシステムです。PCR 反応からダイレクトに DNA を精製するだけでなく、同じシステムで TAE および TBE 中 のアガロースゲルスライスからの DNA 抽出も行える便利なシス テムです。DNA 結合容量 40µg のメンブレンをベースにしたこの システムは他の SV シリーズ同様に精製操作を遠心（Spin）また は吸引（Vacuum）で行うことができます。本製品の品質は、精 製した DNA が蛍光シークエンシングにより＞ 98％の精度で 700 塩基以上解析可能であることで確認されています。 ・便利：処理量に合わせて手動 / 自動が選べる柔軟性 ・迅速：96PCR 産物を約 20 分で精製 ・高い回収率：500bp および 1000bp 断片の平均回収率は 90% ・柔軟性：ゲルスライスからの DNA 精製にも使用可能 ・機能的：精製 DNA は BigDye ターミネーターシークエンシングや マイクロアレイ分析に最適 ・適応性：多くのロボットプラットフォームに適応 本製品は PCR 産物を 96 ウェルフォーマットで簡単に精製するた めのシステムです。メンブレンベースの結合プレートに PCR 産 物をトラップし、余剰のヌクレオチドやプライマーを除去します。 バキュームマニホールドを用いた手動精製および Biomek® 2000/ FX などの自動分注機を用いた自動精製も行えます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV Gel and PCR Clean-up System 50 回分 A9281 11,000 250 回分 A9282 45,000 1000 回分 A9285 お問合せ下さい プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsvgelpcr.html ※吸引で処理する場合、マニホールド、アダプターが別途必要です（3 ページ参照）。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV 96 PCR Clean-Up System 1 × 96 A9340 25,000 4 × 96 A9341 80,000 8 × 96 A9342 150,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsv96pcr.html ※精製処理にはマニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up Systemでゲル抽出 する前後のPCR産物のゲル分析 （U）精製前、（P）精製後、レーン1：1kb DNA Ladder（カタログ番号 G5711） PCR産物の精製と回収 PCR断片100, 200, 300, 500および1,000 bpは、Wizard® SV 96 PCR Clean-Up System およびBeckman Biomek® 2000 robotic workstationを組み合わせて精製した。精 製後（P）と精製前（U）の断片を2%アガロースゲルで分離し、エチジ ウムブロマイドで染色した。 DNA断片長ごとの回収率 DNA断片長 回収率 55bp 26% 70bp 39% 85bp 55% 100bp 84% 500bp 89% 1,000bp 92% 3,199bp 95% 9,416bp 95% 23,130bp 47% 溶出液量ごとの回収率 溶出液量 回収率 10µl 35% 15µl 98% 25µl 98% 50µl 100% 75µl 100% 100µl 100% フラグメント精製 Wizard® SVおよびSV96 Genomic DNA Purification System による様々なサンプルからのゲノムDNA平均収量 サンプル サンプル量 平均収量 Mouse Tail Clipping 20mg 20µg Mouse Liver 20mg 15µg Mouse Heart 20mg 10µg Mouse Brain 20mg 6µg CHO Cells 1×106 cells 5µg NIH3T3 Cells 1×106 cells 9µg 293 Cells 1×106 cells 8µg 7 Nucleic Acid Purification ガイド ゲノム DNA 精製システム Wizard® SV Genomic DNA System 96 ウェルゲノム DNA 精製システム Wizard® SV 96 Genomic DNA System ･ 迅速：ライセート調製後 20 分で操作完了 ･ サンプル処理量：20mg 組織、1.2cm マウス尾、5×106 細胞 ･ 高収量：20 ～ 30µg DNA（1.2cm マウス尾の場合） ･ 高純度：PCR にそのまま使用可能 ･ 柔軟性：遠心法と吸引法を選べます。 この製品は、組織（マウス尾など）や培養細胞から迅速、簡便に インタクトなゲノム DNA を精製するシステムです。サンプル数 にもよりますが通常 20 分で精製することができます。また、こ のシステムは他の SV シリーズ同様に精製操作を遠心（Spin）ま たは吸引（Vacuum）で行うことができます。組織サンプルの場 合、Proteinase K が別途必要です。1 回あたりのサンプル処理量は、 組織の場合約 20mg、培養細胞の場合 1 × 104 ～ 5 Ｘ 106 個です。 本システムで精製された良質なゲノム DNA は、PCR、アガロー スゲル分析、制限酵素処理に最適です。 ･ 迅速：マウス尾の場合 45 ～ 60 分、培養細胞の場合 30 分で操作完了 ･ サンプル処理量：20mg 組織、1.2cmマウス尾、5×106 細胞 ･ 高収量：20 ～ 30µg DNA（1.2cm マウス尾の場合） ･ 高純度：PCR にそのまま使用可能 ･ 自動化：自動精製に最適のシステム この製品は、組織（マウス尾など）や培養細胞から 96 ウェルフォー マットで迅速、簡便にインタクトなゲノム DNA を精製するシス テムです。このシステムでは手動操作はもとより、自動分注装置 を用いた自動化にも対応します。遠心や沈殿操作が不要で、組織 / 細胞のライセートからゲノム DNA 精製まで 1 時間以内に完了し ます。組織サンプルの場合、Proteinase K が別途必要です。 本システムで精製された良質なゲノム DNA は、PCR、アガロー スゲル分析、制限酵素処理に最適です。自動分注機で操作する場 合は、機器専用のマニホールドが必要です。ゲノム DNA は吸引 濾過により精製されるので、遠心操作が不要です。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV Genomic DNA Purification System 50 回分 A2360 18,000 250 回分 A2361 70,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsvgen.html ※吸引で処理する場合、アダプターが別途必要です（3 ページ参照）。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） Wizard ® SV 96 Genomic DNA Purification System 1 × 96 回分 A2370 32,000 4 × 96 回分 A2371 119,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/wizsv96gen.html ※手動で操作する場合、マニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 クロスコンタミネーションアッセイ 96ウェルプレートへマウス尾サンプルおよび水を交互に分注し、ゲノムDNAを精製し た。精製後、各ウェルから1µlを鋳型として、マウスIL-1β特異的プライマーで増幅した。 10µlのPCR産物を1.5%アガロースゲルで分離し、エチジウムブロマイドで染色した。バン ドのサイズは約1.2kb。水をサンプルとしたものからはPCR産物は検出されなかった。 M –C +C C4 C5 C6 C7 C8 D4 D5 D6 D7 D8 M E4 E5 E6 E7 E8 3712TA04_2A ゲノムDNA精製 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 精製したゲノムDNAを用いたPCR分析 様々な組織から精製したゲノムDNA各1µlをサンプルとし、PCR Master Mix（カ タログ番号 M7502）およびマウスIL1-β特異的プライマー（1.2kb PCR産物を 合成）を用いてPCRを行った。陽性コントロールとしてMouse Genomic DNA （カタログ番号 G3091）を使用した。レーン1, 1Kb DNA Ladder（カタログ番号 G5711）; レーン2, 陰性コントロール ; レーン3, 陽性コントロール ; レーン4, 尾（遠心法）; レーン5, 肝臓（遠心法）; レーン6, 心臓（遠心法）; レーン7, 脳（遠 心法）; レーン8, 尾（吸引法）; レーン9, 肝臓（吸引法）; レーン10, 心臓（吸引法） ; レーン11, 脳（吸引法） Total RNA 精製システム SV Total RNA Isolation System 96 ウェル Total RNA 精製システム SV 96 Total RNA Isolation System ･ 高純度：DNase 処理でゲノム DNA を除去 ･ 柔軟性：手動でも自動でも操作可能 ･ 迅速：96 サンプル 60 分以内に処理 ･ 簡単：フェノクロ抽出、エタノール沈殿、遠心操作が不要 ･ 保証：精製された RNA を RT-PCR でテスト済み 本製品は組織培養細胞から純度の高いインタクトな RNA を迅 速・簡単に精製するシステムです。Beckman 社の Biomek® 2000 や FX などの自動化ワークステーションにも対応し、1 時間以内 に 96 サンプルから Total RNA を精製することができます。また、 PCR に影響を及ぼすゲノム DNA の混入を低減する DNase 処理も 含まれています。 ・確実：DNase 処理によりゲノムの混入は最低限 ･ 高性能：インタクト、高純度、高収量RNAを調製 （A260/A280>1.8). ･ 順応性：遠心法 (spin) と吸引法 (vacuum) を選択可能 ･ 安全性：フェノール不要で迅速なプロトコル ･ 迅速：組織サンプルの場合、Total RNA を 60 分で単離 ･ 便利：同じサンプルからのRNA/DNA単離も可能。 SV Total RNA Isolation System は細胞 , 組織や血液などのサンプル から、迅速、安全に Total RNA を効率よく単離する進歩的なシス テムです。RNA の単離は遠心法（spin）あるいは吸引法（vacuum） により行うことができます。また PCR に影響を及ぼすゲノム DNA の混入を低減する DNase 処理も含まれます。従来のグアニ ジン – フェノール / クロロフォルム方式に比べ短時間に処理する ことができ、少量サンプルの処理能力に優れています。このシス テムで単離された RNA は RT-PCR やノーザンブロッティングを 含む通常の分子生物学実験に使用できます。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） SV Total RNA Isolation System 10 回分 Z3101 10,000 50 回分 Z3100 28,000 250 回分 Z3105 128,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/svrna.html ※吸引で処理する場合、マニホールド、アダプターが別途必要です（3 ページ参照）。 製品名 サイズ カタログ番号 価格（￥） SV 96 Total RNA Isolation System 1×96 ウェル分 Z3500 44,000 5×96 ウェル分 Z3505 176,000 プロメガ資料：www.promega.co.jp/lit/sv96rna.html ※精製処理にはマニホールドが別途必要です（3 ページ参照）。 RT-PCRによる混入ゲノ ムDNAの比較 Total RNAはプロメガ及び他社 製品を用いて、マウス肝臓 30mgから単離し、イントロ ンを挟む IL-1βプライマーで RT-PCRを行った。ゲノムDNA の混入があると目的バンド （401bp）の他に1,123bpのバン ドが観察されます。 植物、細菌、酵母からのTotal RNA精製 レーン1：大腸菌（E.coli）、 レーン2：トマト（Lycopersicon.sp）、 レーン3：酵母（S.cerevisiae） プロメガ株式会社 本 社 〒103-0011 東京都中央区日本橋大伝馬町14-15 マツモトビル Tel. 03-3669-7981／Fax. 03-3669-7982 大阪事務所 〒532-0011 大阪市淀川区西中島6-8-8 花原第8ビル704号室 Tel. 06-6390-7051／Fax. 06-6390-7052 ※製品の仕様、価格については2010年7月現在のものであり予告なしに変更することがあります。 販売店 少数の細胞から精製したTotal RNAのRT-PCRによる検出 Total RNAはヒト神経芽腫細胞（SH-SY5Y cells）から精製した。溶出液4µlを 鋳型としてβ-Actin Primer Pairs（カタログ番号G5740）でRT-PCRを行った。 細胞数を各レーン上に示し、391個の細胞からでも明瞭なバンドを示した。 Total RNA 精製 PK100701 M 1 2 3 6,583 4,981 3,638 2,604 1,908 1,383 955 623 281