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PCR・逆転写 PCR・定量 PCR 2024

PCR Optimization kit 最適なPCR 条件を確実に絞り込む 予め調製された8 種のバッファーとMgCl2、ホットスター ト用ポリメラーゼが含まれるキットで、手持ちのプライ マーまたはプローブを用いて個々の実験に最適なPCR 条件を迅速に決定することができます。一度最適条件 が決まれば、試薬のオーダーメードも可能です。 • 通常のPCR、マルチプレックスPCR、定量（リアルタイム）PCR、 GC リッチや阻害剤に強いPCR の最適条件の確実な検討 • cGMP グレード（cGMP については2 ページ下をご参照ください） • 最適条件決定後、試薬のオーダーメードが可能：dNTP を含む バッファーに、ご指定の濃度のポリメラーゼとMgCl2 を加えた マスターミックスを製造（ロット分析証明書つき） 製品名構成品サイズカタログ番号 PCR Optimization Kit • GoTaq® MDx Hot Start Polymerase • 5X PCR Buffer（8 種：Buffer A ～ H） • MgCl2 1 式D2381 PCR 逆転写PCR 定量PCR キット選択ガイド A Buffer A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 B C D E F G H Buffer B Buffer C Buffer D Buffer E Buffer F Buffer G Buffer H Titrate MgCl2 (mM) 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 8 種のバッファーについてMgCl2 濃度を振ってPCR を 実施し、他より結果の良い組み合わせを1 つ以上選 び、マスターミックス候補とする。 Buffer A, XmM MgCl2, Y units enzyme Buffer D, XmM MgCl2, Y units enzyme Buffer E, XmM MgCl2, Y units enzyme Buffer G, XmM MgCl2, Y units enzyme Varied annealing temperature –6°C –4°C –2°C Calculated +2°C Tm +4°C +6°C 1 で選んだ候補について、計算上のアニーリング温 度から上下2℃刻みで温度条件を振り、PCR を実施す る。最も良い条件を1 つ選ぶ。 A 1.0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 B C D E F G H 1.5 2.5 3.5 4.5 5.5 6.5 7.5 XmM Titrate MgCl2 (mM) Smaller range from XmM determined in Step 1 Buffer ? Determined in Step 2 Titrate Enzyme (Units) 2 で選んだ条件で、ポリメラーゼの濃度を振り、さ らに微調整のためMgCl2 濃度を1 の検討より細かく 振って増幅を行う。 プロトコールの概要 1 バッファーとMgCl2 濃度の最適化2 アニーリング温度の最適化3 ポリメラーゼ濃度の最適化 この他、各バッファー1 種と酵素・MgCl2 を組み合わせたセットもございます。 （バッファーのみの販売はございません） Buffer セットカタログ番号　 A D2301　B D2311　C D2321　D D2331 E D2341　F D2351　G D2361　H D2371 2024 年版 プロメガ株式会社 エンドポイントPCR　Endpoint PCR 製品名構成品マスターミックス タイプ 5′-3′ エキソヌクレアーゼ 活性 3′-5′ エキソヌクレアーゼ 活性 増幅産物 サイズ オーバー ハング スタンダードPCR GoTaq® G2 Green Master Mix • GoTaq® G2 Green Master Mix • Nuclease-Free Water 〇〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 Colorless Master Mix • GoTaq® G2 Colorless Master Mix • Nuclease-Free Water 〇〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® PCR Core System I • GoTaq® DNA Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • 5X Green GoTaq® Flexi Buffer • PCR Nucleotide Mix • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 DNA Polymerase • GoTaq® G2 DNA Polymerase • 5X Green GoTaq® Reaction Buffer • 5X Colorless GoTaq® Reaction Buffer ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 Flexi DNA Polymerase • GoTaq® G2 Flexi DNA Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • 5X Green GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 Hot Start Green Master Mix • GoTaq® G2 Hot Start Green Master Mix • Nuclease-Free Water 〇〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 Hot Start Colorless Master Mix • GoTaq® G2 Hot Start Colorless Master Mix • Nuclease-Free Water 〇〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® G2 Hot Start Polymerase • GoTaq® G2 Hot Start Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • 5X Green GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A 高速エンドポイントPCR GoTaq® Rapid Master Mix • GoTaq® Rapid Master Mix, 2X • Nuclease-Free Water 〇〇ー 高速PCR（伸長 時間10 秒）で 1.6 kb 3′ A ロングPCR GoTaq® Long PCR Master Mix • GoTaq® Long PCR Master Mix, 2X • Long PCR Control Primer Pair • Human Genomic DNA • Nuclease-Free Water 〇〇〇<40 kb 3′ A/ blunt ハイフィデリティーPCR Pfu DNA Polymerase • Pfu DNA Polymerase • Pfu 10X Reaction Buffer w/20 mM MgSO4 ー〇ー<10 kb blunt 遺伝子診断薬グレード（cGMP グレード） GoTaq® MDx Hot Start Polymerase • GoTaq® MDx Hot Start Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • 5X Green GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® MDx Hot Start Polymerase, Glycerol-free • GoTaq® MDx Hot Start Polymerase, Glycerol-Free • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® MDx Hot Start Taq Polymerase, High Concentration • GoTaq® MDx Hot Start Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® MDx DNA Polymerase • GoTaq® MDx Polymerase • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • 5X Green GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A GoTaq® MDx Polymerase, Glycerol-free • GoTaq® MDx DNA Polymerase, Glycerol-Free • 5X Colorless GoTaq® Flexi Buffer • MgCl2 ー〇ー<5 kb 3′ A cGMP グレード cGMP（Current Good Manufacturing Practice）は、医薬品、食品、および医療機器の製造・品質管理において現在米国で適用されている基 準であり、患者と消費者の健康を保護し、cGMP に基づいて製造された製品が安全、効果的かつ信頼できるものであることを保証するため のものです。 2 ホット スタート ローディングダイ 含有dNTP 含有MgCl2 含有サイズ＊ カタログ番号 ー〇〇〇 100 回分M7822 1,000 回分M7823 ーー〇〇 100 回分M7832 1,000 回分M7833 ー〇 選択可別包装別包装200 回分M7660 ー〇 選択可 別途購入 C1141 〇 100 u M7841 500 u M7845 2,500 u M7848 ー〇 選択可 別途購入 C1141 別包装 100 u M7801 500 u M7805 2,500 u M7806 10,000 u M7808 〇 （抗体） 〇〇〇 100 回分M7422 1,000 回分M7423 〇 （抗体） ー〇〇 100 回分M7432 1,000 回分M7433 〇 （抗体） 〇 選択可 別途購入 C1141 別包装 100 u M7401 500 u M7405 2,500 u M7406 10,000 u M7408 〇 （抗体） ー〇〇 100 回分CS3083A02 1,000 回分CS3083A01 〇 （抗体） ー〇〇100 回分M4021 ーー別途購入 C1141 〇 100 u M7741 500 u M7745 〇 （抗体） 〇 選択可 別途購入 U1511 別包装 100 u D6001 500 u D6005 2,500 u D6006 10,000 u D6008 〇 （抗体） ー別途購入 U1511 別包装500 u D6201 〇 （抗体） ー別途購入 U1511 別包装1,000 u D6101 ー〇 選択可 別途購入 U1511 別包装 100 u D4001 500 u D4005 2,500 u D4006 ーー別途購入 U1511 別包装500 u D4101 ＊ キットは50 μl 反応系での使用回数 酵素は100 u で50 μl 反応系80 回分に相当 エンドポイントPCR 構成品& 関連製品 製品名サイズカタログ番号 バッファー 5X Green GoTaq® Reaction Buffer 20 ml M7911 5X Colorless GoTaq® Reaction Buffer 20 ml M7921 5X Green GoTaq® Flexi Reaction Buffer 20 ml M8911 5X Colorless GoTaq® Flexi Reaction Buffer 20 ml M8901 dNTP dNTP Mix, 10 mM 200 μl U1511 1000 μl U1515 dATP, 100 mM 25 μmol U1205 40 μmol U1201 200 μmol U1202 dCTP, 100 mM 25 μmol U1225 40 μmol U1221 200 μmol U1222 dGTP, 100 mM 25 μmol U1215 40 μmol U1211 200 μmol U1212 dTTP, 100 mM 25 μmol U1235 40 μmol U1231 200 μmol U1232 Set of dATP, dCTP, dGTP, dTTP （濃度各100 mM） 各10 μmol U1330 各25 μmol U1420 各40 μmol U1240 各200 μmol U1410 dUTP, 100 mM 40 μmol U1191 Set of dUTP, dCTP, dGTP, dATP （濃度各100 mM） 各10 μmol U1335 各40 μmol U1245 dNTP cGMP グレード PCR Nucleotide Mix, 10 mM 200 μl C1141 1,000 μl C1145 PCR Nucleotide Mix, 25 mM 200 μl U1431 1,000 μl U1432 MgCl2 Magnesium Chloride Solution, 25 mM 1.5 ml A3511 25 ml A3513 A. B. 5μl 10μl 15μl 20μl 5μl 10μl 15μl 20μl After Before 1X Green GoTaq® Reaction Buffer を用いた GoTaq® DNA Polymerase 反応の電気泳動 5X Green、5X Colorless Reaction Buffers にはサンプルの比重を増加さ せる化合物が含まれており、アガロースゲルのウェル内でサンプルが 容易に沈みむためPCR 反応後のサンプルを直接アガロースにアプラ イし、電気泳動を行うことができます。Green Reaction Buffer に含まれ る2 色の色素成分（青色および黄色）がPCR 反応を阻害することは ありません。青色色素は3 ～ 5 kb* のDNA 断片と同じ割合で移動し、 黄色の色素は50 bp 以下* のDNA 断片と同じ割合で移動します。 Colorless Reaction Buffer は、増幅反応後に色素が影響を与える吸光値 や蛍光値の測定などのアプリケーションに推奨されます。 * ゲルの濃度に依存します。 3 GoTaq® G2 Green Master Mix GoTaq® G2 DNA Polymerase、dNTP、MgCl2 および反応バッファー のプレミックスで、鋳型とプライマーを入れるだけで使用できま す。最適化された酵素とバッファーの組み合わせにより、標準的 なTaq DNA Polymerase よりも優れたパフォーマンスを示します。 MgCl2 濃度は使用時の1X 反応液では1.5 mM になります。 あらかじめローディングダイが添加されているため、PCR 反応物 をそのままアガロースゲルへアプライできます。 • 優れた検出感度 • 迅速で能率的なローディングダイ入りマスターミックス • ジェノタイピングで実績多数！（プロトコル有り） DMSO（5%）、Betaine（1 M）の添加が可能です。 12299MA 2.2kb APC model 1.3kb  -globin model 360bp  -1 antitrypsin model 2.0kb 1.5kb 1.0kb 0.5kb M G C L R T Q N G C L R T Q N G C L R T Q N M Consistent performance with GoTaq® G2 Master Mixes GoTaq® G2 PCR Master Mix は 様々なターゲットで高い収量を示す 3.3 ng のヒトDNA を鋳型とし、GoTaq® G2 DNA Polymerase Green（G）とColorless（C） Master Mix、他社製品（L、R、T、Q、N） を用いてそれぞれのマニュアルに従い増 幅を行った。他社製品の増幅結果にバラ つきが見られるのに対し、GoTaq® G2 DNA Polymerase Master Mix は安定して高い収量 を示した。 GoTaq® G2 Hot Start Master Mix GoTaq® G2 DNA Polymerase, dNTP, MgCl2 および反応バッ ファーのプレミックスで、鋳型とプライマーを入れるだけで 使用できます。GoTaq® G2 DNA Polymeraseには活性をブロッ クする抗体が結合しており、ポリメラーゼ活性は初回の変 性ステップ（94–95℃、2 分間）で修復されます。このホッ トスタートPCR ではポリメラーゼ活性が70℃以下では阻害 されるので、室温でのセットアップが可能です。 • ホットスタートだからプライマーダイマーや非特異的産物を 低減 • 調製後24 時間室温に置いても変わらないパフォーマンス • 反応バッファーは色素を含むものと透明のものから選択可能 DMSO（5%）、Betaine（1 M）の添加が可能です。 クルードサンプルで増幅の実績があります。 GoTaq® G2 Hot Start Master Mix は 優れた感度と頑健な増幅を示す 2.2 kb APC 標的遺伝子を表示量のgDNA（33 ng、3.3 ng and 330 pg［各酵素 左から右］）か らGoTaq® G2 Hot Start Green（G）、Colorless（C） Master Mix および他社製品（L1、L2、Q+、T） を用いて増幅した。 GoTaq® Long PCR Master Mix GoTaq® Hot Start DNA Polymerase と独自の耐熱性ハイフィデリティポリメラー ゼを組み合わせたマスターミックスです。コントロール用としてヒトゲノム DNA ならびに17.5 kb のβグロビン断片増幅用のプライマーが付属します。 10212TA bp 23,130 9,416 6,557 4,361 2,322 2,027 M 1 2 3 M 高感度に幅広いテンプレート濃度で増幅 GoTaq® Long PCR Master Mix を用い、ヒトβグロビン遺伝子クラス ターから17.5 kb の断片を段階希釈したテンプレートで増幅した。 • 2 ng のテンプレートから特異的に増幅 • 反応液調製後室温に置き、6 時間までは増幅に影響がないことを確認 200ng　20ng　2ng 11416TB M G M C L1 L2 Q+ T 2kb Robust Yield Superior Sensi vi Lower Sensi vi 4 逆転写PCR　Reverse Transcription PCR 製品名構成品逆転写 酵素 プライマー 含有dNTP 含有MgCl2 含有RNase 阻害剤 含有サイズカタログ番号 GoScript™ Reverse Transcription System • GoScript™ Reverse Transcriptase • GoScript™ 5X Reaction Buffer • MgCl2 • Oligo(dT)15 Primer • Random Primers • PCR Nucleotide Mix • Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor • Nuclease-Free Water M-MLV 別包装別包装別包装別包装 50 回分1 A5000 100 回分1 A5001 GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT) • GoScript™ Enzyme Mix • GoScript™ Reaction Buffer, Oligo(dT) • Nuclease-Free Water M-MLV 〇〇〇〇 50 回分1 A2790 100 回分1 A2791 GoScript™ Reverse Transcription Mix, Random Primers • GoScript™ Enzyme Mix • GoScript™ Reaction Buffer, Random Primers • Nuclease-Free Water M-MLV 〇〇〇〇 50 回分1 A2800 100 回分1 A2801 GoScript™ Reverse Transcriptase • GoScript™ Reverse Transcriptase • GoScript™ 5X Reaction Buffer • MgCl2 M-MLV 別途購入 C1181 or C1101 別途購入 C1141 別包装別途購入 N2611 100 回分1 A5003 500 回分1 A5004 M-MLV Reverse Transcriptase • M-MLV Reverse Transcriptase • M-MLV RT 5X Buffer M-MLV 別途購入 C1181 or C1101 別途購入 U1201 U1221 U1211 U1231 〇別途購入 N2611 10,000 u 2 M1701 50,000 u 2 M1705 M-MLV Reverse Transcriptase, RNase (H-) • M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus • M-MLV RT 5X Buffer M-MLV 別途購入 C1181 or C1101 別途購入 U1201 U1221 U1211 U1231 〇別途購入 N2611 10,000 u 3 M5301 M-MLV Reverse Transcriptase RNase (H-) Point Mutant • M-MLV RT, RNase (H–), Point Mutant • M-MLV RT 5X Buffer M-MLV 別途購入 C1181 or C1101 別途購入 U1201 U1221 U1211 U1231 〇別途購入 N2611 2,500 u 3 M3681 10,000 u 3 M3682 50,000 u 3 M3683 Reverse Transcription System • AMV Reverse Transcriptase (HC) • Reverse Transcription 10X Buffer • dNTP Mix • MgCl2 • Oligo(dT)15 Primer • Random Primers • 1.2 kb Kanamycin Positive Control RNA • Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor • Nuclease-Free Water AMV 別包装別包装別包装別包装100 回分4 A3500 AccessQuick™ RT-PCR System • AMV Reverse Transcriptase • AccessQuick™ Master Mix (2X) • Nuclease-Free Water AMV 遺伝子特異的 プライマーを 別途用意 〇〇ー 20 回分5 A1701 100 回分5 A1702 500 回分5 A1703 Access RT-PCR System • AMV Reverse Transcriptase • T  DNA Polymerase • AMV/T  5X Reaction Buffer • dNTP Mix • MgSO4 • Upstream Control Primer • Downstream Control Primer • Positive Control RNA with Carrier • Nuclease-Free Water AMV 遺伝子特異的 プライマーを 別途用意 別包装別包装ー 20 回分5 A1260 100 回分5 A1250 500 回分5 A1280 AMV Reverse Transcriptase • AMV Reverse Transcriptase • AMV RT 5X Buffer AMV 別途購入 C1181 or C1101 別途購入 U1511 〇別途購入 N2611 300 u 6 M5101 1,000 u 6 M5108 600 u 6 （高濃度品） M9004 1. 1 回の反応でtotal RNA なら5 μg、poly(A) RNA なら500 ng まで鋳型として使用 2. 200 u で2 μg のRNA からcDNA 合成可能 3. 200 u で1 μg のRNA からcDNA 合成可能 4. 1 回の反応で1 μg のRNA を鋳型として使用 5. 1 回の反応で1 pg-1 μg までのRNA を鋳型として使用 6. 30 u で2 μg のRNA からcDNA 合成可能 5 逆転写PCR 構成品& 関連製品 製品名サイズカタログ番号 バッファー M-MLV Reverse Transcriptase Buffer Pack 2 x 1 ml M5313 逆転写用プライマー Random Primers 20 μg C1181 Oligo(dT)15 Primer, 500 ug/ml 20 μg C1101 製品名サイズカタログ番号 RNase 阻害剤 RNasin® RNase Inhibitor 2,500 u N2111 10,000 u N2115 Recombinant RNasin® RNase Inhibitor 2,500 u N2511 10,000 u N2515 RNasin® Plus RNase Inhibitor 2,500 u N2611 10,000 u N2615 5.8S ACTB B2M HPRT RPL29 TBP1 RNA Input Cq Values 30 35 20 10 15 0.001 0.01 0.1 1 10 100 1,000 10,000 100,000 5 25 40 0 幅広いRNA 量で効率的なcDNA 合成 GoTaq® 2-step RT-qPCR system を用いたヒトtotal RNA 中の6 種の異なるターゲット の定量結果を示す。10 倍ずつ濃度を変えた9 点のtotal RNA インプット（10 ng/μl to 0.1 fg/μl）を加えて反応液を調製し、GoScript™ 逆転写反応を行った。各逆転 写反応産物10 μl（100 ng から1 fg インプットRNA に相当）を希釈せず直接 GoTaq® qPCR のサンプルとして使用した。各アッセイは発現レベルが異なる様々な ターゲット、すなわち極めて高レベル発現の5.8S rRNA、高レベル発現のACTB お よびB2M、中間的なHPRT、低レベルのRPL29 およびTBP1 について特異的にな るよう設計した。Total RNA 中におけるそれぞれのターゲット量の違いにともない Cq 値は異なるが、インプット量のlog 変化ごとに≃ 3.3 と理論上に近いサイクル数 変化を示す結果が得られている。 阻害剤に対する耐性 In vitro 転写で合成したRNA をOligo(dT) プライマーを用いて逆転写反応させた（反 応条件は各製品説明書に準拠）。エタノール非存在下および存在下（5%、10% および20%）で逆転写反応を行い、合成したcDNA をGoTaq® qPCR Master Mix を 使用してqPCR 解析した。エタノール非存在下と存在下のサイクル閾値の変化を 転写物レベルの相対変化＝（2Cqinhibitor-Cqnone）に変換した。データは3 回の 独立した実験から得られた平均値を表している。 GoScript™ Reverse Transcriptase GoScript™ Reverse Transcriptase はM-MLV ベースで最新のバッ ファー技術を採用したqPCR 用の逆転写酵素です。阻害物質の 存在下でも希少なものから豊富なものまで幅広いレンジの転写 物をcDNA に合成できるようにデザインされています。 • ハイコピーからローコピーまで幅広いmRNA を転写 • 残存エタノールなどの阻害物質に耐性 • 二次構造をもつ短鎖または長鎖RNA からでも合成 逆転写酵素 性能チャート 逆転写酵素GoScript™ Reverse Transcriptase MMLV RT Point Mutant MMLV RT Deletion Mutant MMLV RT AMV RT 反応温度42℃（37-55℃） 40-55℃ 37℃（～ 50℃） 37℃（～ 42℃） 42℃（37-58℃） Rnase H 活性有り無し無し有り有り 最大合成cDNA 長8.9 kb 7.5 kb 6 kb 5 kb 5 kb 2 次構造への耐性★ ★★★ ★ ★ ★★★ 感度★★★ ★★★ ★★ ★★ ★★★ 用途 長鎖cDNA 合成◎ 〇〇 希少mRNA の検出◎ ◎ 〇〇◎ 2 次構造耐性〇〇 標識プローブ合成〇 6 定量PCR　Quantitative Real-Time PCR（全てホットスタート、Fast モードに対応） 製品名構成品用途 逆転写 サイズ＊ カタログ番号 プライマー含有dNTP 含有MgCl2 含有RNase 阻害剤 含有 ダイベース（インターカレーション法） GoTaq® qPCR Master Mix • GoTaq® qPCR Master Mix, 2X • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 定量PCR ーーーー 500 回分A6001 2,500 回分A6002 GoTaq® 1-Step RT-qPCR System • GoScript™ RT Mix for 1-Step RT-qPCR • MgCl2 • GoTaq® qPCR Master Mix, 2X • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 遺伝子特異的 プライマーを 別途用意 〇〇〇500 回分A6020 GoTaq® 2-Step RT-qPCR System • GoScript™ Reverse Transcriptase • GoScript™ 5X Reaction Buffer • MgCl2 • GoTaq® qPCR Master Mix, 2X • Oligo(dT)15 Primer • PCR Nucleotide Mix • Random Primers • Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 別包装別包装別包装別包装 逆転写 50 回分 リアルタイム 200 回分 A6010 プローブベース（ハイブリダイゼーション法） GoTaq® Probe qPCR Master Mix • GoTaq® Probe qPCR Master Mix, 2X • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 定量PCR ーーーー 200 回分A6101 1,000 回分A6102 GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System • GoTaq® Probe Master Mix with dUTP • GoScript™ RT Mix for 1-Step RT-qPCR • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 遺伝子特異的 プライマーを 別途用意 〇〇〇 200 回分A6120 1,250 回分A6121 GoTaq® Probe 2-Step RT-qPCR System • GoScript™ Reverse Transcriptase • GoScript™ 5X Reaction Buffer • MgCl2 • GoTaq® Probe qPCR Master Mix, 2X • Oligo(dT)15 Primer • PCR Nucleotide Mix • Random Primers • Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 別包装別包装別包装別包装 逆転写 50 回分 リアルタイム 200 回分 A6110 * 20 μl 反応系での使用回数 1-Step と2-Step の違い メリット • サンプル調製中の クロスコンタミネーション低減 • 数回使用したらサンプルを 捨てられる • 結果が早い デメリット • プライマーダイマーのリスク増 • cDNA を他の解析に使えない • cDNA は不要 • サンプルは使用後捨ててよい • ターゲットが1 つか数個くらい • 自動分注機を使っている こんな人は 1-step メリット • 逆転写でもPCR でも パフォーマンスを最適化できる • cDNA を他の実験に使える デメリット • 逆転写酵素とバッファーが リアルタイムPCR を阻害し得る • 簡便さが減り、より時間がかかる • 1step と比べると コンタミネーションのリスク増 • cDNA をとっておきたい • サンプルの量が限られている • 1 サンプルにつき 多くのターゲットを解析 こんな人は 2-step プロトコール概要 反応液調製 • 鋳型RNA • 遺伝子特異的プライマー • 1-Step Master Mix 反応液調製、cDNA 合成 • 鋳型RNA • Random / Oligo(dT) Primer • GoScript™ Mix 希釈、下記添加 • GoTaq® Reaction Master Mix • 遺伝子特異的プライマー 解析 • リアルタイムPCR 装置で • 逆転写定量PCR を実施 1 1 2 1-step 2-step 7 ダイベースとプローブベースの選択 ダイベース（インターカレーション法） プローブベース（ハイブリダイゼーション法） 増幅産物の標識dsDNA 結合色素蛍光標識プローブ コスト〇△ 機器あらゆる定量PCR 機器プローブの蛍光波長に合ったフィルターが必要 特異性全てのdsDNA を定量プローブ配列を有する増幅産物を定量 マルチプレックスー〇（異なる蛍光色素とフィルターを使用） 融解曲線解析によるQC とジェノタイピング〇ー スループット〇◎（マルチプレックスの場合） サンプル量少最少（マルチプレックスの場合） バリデーション要要 アプリケーション 遺伝子発現定量△ 〇 DNA 定量〇〇 ChIP 〇〇 SNP ジェノタイピングー〇 microRNA ー〇 コピー数解析ー〇 体細胞変異の検出ー〇 パスウェイ解析ー〇 デジタルPCR ー〇 標的によるキットの選択 ゲノムDNA、cDNA GoTaq® qPCR Master Mix GoTaq® Probe qPCR Master Mix RNA GoTaq® 1-Step RT-qPCR System GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System GoTaq® 2-Step RT-qPCR System GoTaq® Probe 2-Step RT-qPCR System GoTaq® Probe qPCR Master Mix の反応系5 μl での増幅 ヒトゲノムDNA の希釈系列を用い、384 ウェル、5 μl の反応系でTH01 を検出 した。鋳型量3.2 pg の場合、GoTaq® で増幅が見られた GoTaq® qPCR Master Mix GoTaq® Probe qPCR Master Mix 11722MA Only Promega detected 3.2pg of DD140 gDNA 50ng 10ng 2ng 0.4ng 80pg 16pg 3.2pg Promega 21.8 23.7 26.0 28.1 30.8 33.6 35.5 Vendor L 22.8 24.4 26.7 29.2 32.0 36.0 0.0 0 5 10 15 25 30 35 40 20 C q • 明るい蛍光物質BRYT Green® 採用で高感度、 SYBR Green I タイプの製品と置き換えできる • ホットスタートタイプで室温調製可能、 オートメーションシステムにも対応 • 反応系は5 μl までスケールダウン可能 • 適合プローブ： PrimeTime, TaqMan, Molecular Beacon など 阻害物質に強いGoTaq® qPCR シリーズ inhibitor Standard Curve slope intercept R2 10％ Guanidium Thiocyanate -3.52 40.1 0.998 2% Ethanol -3.54 40.5 0.999 Control（no inhibitor） -3.50 40.1 0.999 RNA サンプルに各阻害物質を添加し、GAPDH のmRNA をGoTaq® 1-Step RT-qPCR System を用いて増幅した。 検量線測定では阻害物質の影響は見られず、コントロールと同様の結果を示した。 8 環境サンプル中のDNA/RNA 定量（全てホットスタート、Fast モードに対応） 製品名構成品用途 逆転写 プライマー サイズ＊ カタログ番号 含有 dNTP 含有 MgCl2 含有 RNase 阻害剤 含有 定量PCR GoTaq® Enviro qPCR System • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 定量PCR ーーーー 200 回分AM2000 1,000 回分AM2001 GoTaq® Enviro RT-qPCR System • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 遺伝子特異的 プライマーを 別途用意 〇〇〇 200 回分AM2010 1,000 回分AM2011 定量PCR による排水からのSARS-CoV-2 検出 GoTaq® Enviro Wastewater SARS-CoV-2 System, N1/N2/E 検出遺伝子：N1、N2 またはE 定量スタンダード：N+E、PMMoV RNA • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • SARS-CoV-2 (N+E) RNA, 4 x 106 copies/μl • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl • N1 and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • N2 and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • E and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇200 回分AM2100 GoTaq® Enviro Wastewater SARS-CoV-2 System, N1 検出遺伝子：N1 定量スタンダード：N+E、PMMoV RNA • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • SARS-CoV-2 (N+E) RNA, 4 x 106 copies/μl • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl • N1 and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇200 回分AM2110 GoTaq® Enviro Wastewater SARS-CoV-2 System, N2 検出遺伝子：N2 定量スタンダード：N+E、PMMoV RNA • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • SARS-CoV-2 (N+E) RNA, 4 x 106 copies/μl • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl • N2 and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇200 回分AM2120 GoTaq® Enviro Wastewater SARS-CoV-2 System, E 検出遺伝子：E 定量スタンダード：N+E、PMMoV RNA • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • SARS-CoV-2 (N+E) RNA, 4 x 106 copies/μl • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl • E and PMMoV Primer/Probe/IAC Mix, 20X • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇200 回分AM2130 GoTaq® Enviro PMMoV Quant Kit, Quasar® 670 検出遺伝子：PMMoV 定量スタンダード：PMMoV RNA • GoScript™ Enzyme Mix • GoTaq® Enviro Master Mix, 2X • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl • PMMoV Primer/Probe Mix, Quasar® 670 • CXR Reference Dye • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇100 回分AM2140 MS2 RT-qPCR Kit 検出遺伝子：MS2 定量スタンダード：MS2 DNA • 20X MS2 Primer/ Probe Mix • GoTaq® WW Master Mix • GoScript® Enzyme Mix • Quanti cation Standard RNA • Nuclease-Free Water 逆転写 ＋ 定量PCR 〇〇〇〇100 回分CS317417 スタンダードRNA・dsDNA PMMoV RNA • PMMoV RNA, 4 x 106 copies/μl スタンダード RNA ーーーー100 μl AM2070 SARS-CoV-2 (N+E) RNA • SARS-CoV-2 (N+E) RNA, 4 × 106 copies/μl スタンダード RNA ーーーー100 μl AM2050 SARS-CoV-2 (N+E) dsDNA • SARS-CoV-2 (N+E) dsDNA, 2 × 106 copies/μl スタンダード dsDNA ーーーー100 μl AM2060 定量PCR コントロールアッセイ IPC qPCR Inhibition Control Assay, CAL Fluor® 560 • IPC qPCR Inhibition Control, CAL Fluor® 560 • CXR Reference Dye qPCR 用 コントロール アッセイ ーーーー100 回分AM2030 IAC RT-qPCR Inhibition Control Assay, CAL Fluor® 560 • IAC RT-qPCR Inhibition Control, CAL Fluor® 560 • CXR Reference Dye RT-qPCR 用 コントロール アッセイ ーーーー100 回分AM2040 ダイレクトPCR 用前処理試薬 XpressAmp™ Direct Ampli cation Reagents • XpressAmp™ Lysis Buffer • XpressAmp™ Solution • 1-Thioglycerol サンプル前 処理 （ダイレクト にRT-PCR が 可能となる） ーーーー 250 回分A8882 3,000 回分A8880 9 GoTaq® Enviro qPCR System による排水からのエムポックス検出 Mpox ウイルスDNA およびPepper Mild Mottle ウイルス（PMMoV）RNA は、 qPCR（Mpox）またはRT qPCR（PMMoV）で増幅した。ゼロウイルスコントロー ルを除き、ウイルスをスパイクしたすべてのサンプルでMpox ターゲットが検 出および定量された。コントロールPMMoV ターゲットは、テストしたすべての サンプルで検出された（右図）。 低温殺菌した下水に、非活性化したMpox ウイルスの2 倍希 釈系列を添加した。40ml のサンプルをPureYield™ Midicolumn を使用しVac Man® Laboratory Vacuum Manifold（カ タログ番号A7231）で吸引、濃縮した。濃縮物をメンブレン 上で洗浄し、溶出後に自動核酸精製装置Maxwell® RSC Instrument にてMaxwell® RSC Enviro Total Nucleic Acid Kit（カタ ログ番号AS1831）を用い精製および濃縮を行った。 GoTaq® Enviro qPCR and RT-qPCR System PCR 阻害剤存在下でもターゲットを確実に増幅させるために酵素／バッファー を最適化させた、蛍光プローブ法リアルタイムPCR 用マスターミックス試薬で す。室温調整が可能なホットスタートタイプであり、ポリメラーゼ、MgCl2、 dNTP、および専用バッファーで構成されたマスターミックスであるため、反応 液の調整もスムーズです。 定量PCR コントロールアッセイ試薬（AM2030、AM2040）と組み合わせるこ とで、システムの評価も実施できます。 • 阻害剤を多く含む糞便や環境サンプルでも ターゲットを確実に増幅 • サンプル量が多くても阻害は最小のため、 低コピーでも高感度に検出 • 高い増幅力だからマルチプレックスPCR と の相性も抜群 2 μl 5 μl Δ Cq 値（IPC） 4 0 1 2 3 ヒト 糞便土壌環境水イヌ 糞便 他社Environmental PCR 試薬 4 0 1 2 3 ヒト 糞便土壌環境水イヌ 糞便 GoTaq® Enviro qPCR 糞便および環境由来DNA サンプルにおけるPCR 阻害の影響をインターナルポジティブコントロール（IPC）を用いて検証した。 Δ Cq 値が0 に近いほど、阻害が少ないことを示す。テンプレート量5 μl（20 μl 反応系）でも、GoTaq® Enviro はΔ Cq 値がほとん ど変化しない高い阻害耐性を示している。 プロトコール 10 PCR・逆転写PCR・定量PCR 2024 年版 エンドポイントPCR 構成品& 関連製品 3 ページ 製品名 サイズ カタログ番号 価格（ ¥） バッファー 5X Green GoTaq® Reaction Buffer 20 ml M7911 11,900 5X Colorless GoTaq® Reaction Buffer 20 ml M7921 11,700 5X Green GoTaq® Flexi Reaction Buffer 20 ml M8911 12,000 5X Colorless GoTaq® Flexi Reaction Buffer 20 ml M8901 11,400 dNTP dNTP Mix, 10 mM 200 μl U1511 6,400 1,000 μl U1515 13,900 dATP, 100 mM 25 μmol U1205 13,500 40 μmol U1201 18,900 200 μmol U1202 67,200 dCTP, 100 mM 25 μmol U1225 12,800 40 μmol U1221 18,900 200 μmol U1222 67,200 dGTP, 100 mM 25 μmol U1215 12,800 40 μmol U1211 18,900 200 μmol U1212 67,200 dTTP, 100 mM 25 μmol U1235 12,800 40 μmol U1231 17,400 200 μmol U1232 67,200 Set of dATP, dCTP, dGTP, dTTP （濃度各100 mM） 各10 μmol U1330 17,000 各25 μmol U1420 36,200 各40 μmol U1240 57,200 各200 μmol U1410 198,400 dUTP, 100 mM 40 μmol U1191 21,100 Set of dUTP, dCTP, dGTP, dATP （濃度各100 mM） 各10 μmol U1335 20,400 各40 μmol U1245 69,600 dNTP cGMP グレード PCR Nucleotide Mix, 10 mM 200 μl C1141 14,600 1,000 μl C1145 53,800 PCR Nucleotide Mix, 25 mM 200 μl U1431 14,600 1,000 μl U1432 50,000 MgCl2 Magnesium Chloride Solution, 25 mM 1.5 ml A3511 9,800 25 ml A3513 14,700 PCR Optimization Kit 1 ページ 製品名 サイズ カタログ番号 価格（ ¥） PCR Optimization Kit 1 式D2381 241,900 5X PCR Buffer A* 1 式D2301 64,700 5X PCR Buffer B* 1 式D2311 64,700 5X PCR Buffer C* 1 式D2321 64,700 5X PCR Buffer D* 1 式D2331 64,700 5X PCR Buffer E* 1 式D2341 64,700 5X PCR Buffer F* 1 式D2351 64,700 5X PCR Buffer G* 1 式D2361 64,700 5X PCR Buffer H* 1 式D2371 64,700 * バッファーに酵素とMgCl2 が付属します エンドポイントPCR 2-3 ページ 製品名 サイズ カタログ番号 価格（ ¥） スタンダードPCR GoTaq® G2 Green Master Mix 100 回分M7822 13,200 1,000 回分M7823 77,800 GoTaq® G2 Colorless Master Mix 100 回分M7832 11,500 1,000 回分M7833 79,300 GoTaq® PCR Core System I 200 回分M7660 30,800 GoTaq® G2 DNA Polymerase 100 u M7841 8,000 500 u M7845 31,000 2500 u M7848 150,000 GoTaq® G2 Flexi DNA Polymerase 100 u M7801 8,000 500 u M7805 31,000 2500 u M7806 145,000 10,000 u M7808 お問合せ GoTaq® G2 Hot Start Green Master Mix 100 回分M7422 16,500 1,000 回分M7423 140,000 GoTaq® G2 Hot Start Colorless Master Mix 100 回分M7432 16,600 1,000 回分M7433 148,000 GoTaq® G2 Hot Start Polymerase 100 u M7401 13,700 500 u M7405 51,200 2,500 u M7406 146,000 10,000 u M7408 565,000 高速エンドポイントPCR GoTaq® Rapid Master Mix 100 回分CS3083A02 お問合せ 1,000 回分CS3083A01 お問合せ ロングPCR GoTaq® Long PCR Master Mix 100 回分M4021 73,200 ハイフィデリティーPCR Pfu DNA Polymerase 100 u M7741 23,100 500 u M7745 94,000 遺伝子診断薬グレード（cGMP グレード） GoTaq® MDx Hot Start Polymerase 100 u D6001 13,200 500 u D6005 54,100 2,500 u D6006 178,200 10,000 u D6008 677,200 GoTaq® MDx Hot Start Polymerase, Glycerol-free 500 u D6201 54,100 GoTaq® MDx Hot Start Taq Polymerase, High Concentration 1,000 u D6101 103,000 GoTaq® MDx DNA Polymerase 100 u D4001 10,300 500 u D4005 37,800 2,500 u D4006 134,700 GoTaq® MDx Polymerase, Glycerol-free 500 u D4101 38,500 価格リスト 全製品共通関連製品 製品名サイズカタログ番号価格（¥） 水：DNase、RNase 活性フリー Nuclease-Free Water 50 ml P1193 10,000 150 ml P1195 19,500 500 ml P1197 21,700 1,000 ml P1199 24,300 11 逆転写PCR 5 ページ 製品名サイズカタログ番号価格（¥） GoScript™ Reverse Transcription System 50 回分A5000 46,300 100 回分A5001 91,400 GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT) 50 回分A2790 44,600 100 回分A2791 60,500 GoScript™ Reverse Transcription Mix, Random Primers 50 回分A2800 46,200 100 回分A2801 60,500 GoScript™ Reverse Transcriptase 100 回分A5003 53,000 500 回分A5004 118,900 M-MLV Reverse Transcriptase 10,000 u M1701 15,400 50,000 u M1705 56,000 M-MLV Reverse Transcriptase, RNase (H-) 10,000 u M5301 30,700 M-MLV Reverse Transcriptase RNase (H-) Point Mutant 2,500 u M3681 11,400 10,000 u M3682 40,800 50,000 u M3683 157,000 Reverse Transcription System 100 回分A3500 94,600 AccessQuick™ RT-PCR System 20 回分A1701 28,000 100 回分A1702 82,500 500 回分A1703 332,200 Access RT-PCR System 20 回分A1260 25,400 100 回分A1250 80,000 500 回分A1280 320,300 AMV Reverse Transcriptase 300 u M5101 24,000 1,000 u M5108 57,200 600 u （高濃度品） M9004 39,600 逆転写PCR 構成品& 関連製品 6 ページ 製品名サイズカタログ番号価格（¥） バッファー M-MLV Reverse Transcriptase Buffer Pack 2 x 1 ml M5313 7,300 逆転写用プライマー Random Primers 20 μg C1181 7,900 Oligo(dT)15 Primer, 500 ug/ml 20 μg C1101 11,100 RNase 阻害剤 RNasin® RNase Inhibitor 2,500 u N2111 32,000 10,000 u N2115 67,000 Recombinant RNasin® RNase Inhibitor 2,500 u N2511 27,800 10,000 u N2515 58,400 RNasin® Plus RNase Inhibitor 2,500 u N2611 28,800 10,000 u N2615 58,400 定量PCR 7 ページ 製品名サイズカタログ番号価格（¥） ダイベース（インターカレーション法） GoTaq® qPCR Master Mix 500 回分A6001 52,600 2,500 回分A6002 217,800 GoTaq® 1-Step RT-qPCR System 500 回分A6020 77,000 GoTaq® 2-Step RT-qPCR System 逆転写50 回分 リアルタイム200 回分A6010 61,700 プローブベース（ハイブリダイゼーション法） GoTaq® Probe qPCR Master Mix 200 回分A6101 23,700 1,000 回分A6102 97,400 GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR System 200 回分A6120 70,100 1,250 回分A6121 351,300 GoTaq® Probe 2-Step RT-qPCR System 逆転写50 回分 リアルタイム200 回分A6110 47,000 環境サンプル中のDNA/RNA 定量 9 ページ 製品名サイズカタログ番号価格（¥） 定量PCR GoTaq® Enviro qPCR System 200 回分AM2000 40,000 1000 回分AM2001 173,400 GoTaq® Enviro RT-qPCR System 200 回分AM2010 83,000 1000 回分AM2011 275,200 定量PCR による排水からのSARS-CoV-2 検出 GoTaq® Enviro Wastewater SARSCoV- 2 System, N1/N2/E 200 回分AM2100 248,100 GoTaq® Enviro Wastewater SARSCoV- 2 System, N1 200 回分AM2110 248,100 GoTaq® Enviro Wastewater SARSCoV- 2 System, N2 200 回分AM2120 248,100 GoTaq® Enviro Wastewater SARSCoV- 2 System, E 200 回分AM2130 248,100 GoTaq® Enviro PMMoV Quant Kit, Quasar® 670 100 回分AM2140 120,000 MS2 RT-qPCR Kit 100 回分CS317417 お問合せ スタンダードRNA・dsDNA PMMoV RNA 100 μl AM2070 17,600 SARS-CoV-2 (N+E) RNA 100 μl AM2050 17,600 SARS-CoV-2 (N+E) dsDNA 100 μl AM2060 17,600 定量PCR コントロールアッセイ IPC qPCR Inhibition Control Assay, CAL Fluor® 560 100 回分AM2030 31,600 IAC RT-qPCR Inhibition Control Assay, CAL Fluor® 560 100 回分AM2040 31,600 ダイレクトPCR 用前処理試薬 XpressAmp™ Direct Ampli cation Reagents 250 回分A8882 93,300 3,000 回分A8880 985,800 テクニカルサービス ● Tel. 03-3669-7980　● E-Mail : prometec@jp.promega.com PK2401-03B 販売店 日本語 Web site：www.promega.co.jp プロメガ株式会社 本　　　社　〒103-0001 東京都中央区日本橋小伝馬町1-5 PMO日本橋江戸通ビル 7F Tel. 03-3669-7981 大阪事務所　〒541-0051 大阪市中央区備後町4-1-3 御堂筋三井ビルディング Tel. 06-6202-4581 ※製品の仕様、価格については2024 年1 月現在のものであり予告なしに変更することがあります。