RealTime-Glo™ & CytoTox-Fluor™ multiplex assay

技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 www.promega.co.jp 1. 細胞培養表面処理済みの 96well 黒クリアボトムプレートもしくはソリッドプレートに 任意の細胞数で 50uL ずつ播種する。 また、バックグラウンドとして、細胞を含まない培地だけの well も準備する。 2. 翌日、下記の表を参考に RealTime-Glo™とテスト化合物を含む培地を調製する。 Component volume x サンプル数 = 合計 培地, 2x テスト化合物 49.8 μL MT Cell Viability Substrate 0.1 μL NanoLuc® Enzyme 0.1 μL Final volume per sample 50 μL 3. 50uL の RealTime-Glo™試薬とテスト化合物を含む培地を細胞に添加する。 4. 37℃インキュベーターにて、10 分以上培養する。 5. 任意のタイムポイントにて、発光測定する（72 時間まで繰り返し測定可能）。 6. RealTime-Glo™の発光測定終了後、培養プレートを 37℃インキュベーターに戻してお く。 7. CytoTox-Fluor™試薬を調製する： 8. bis-AAF-R110 Substrate と Assay Buffer を 37℃に温める。 9. Assay Buffer 1mL に bis-AAF-R110 Substrate を全量加え、ゆっくりと混ぜ、Substrate Mix を溶かす。 10. 20uL の CytoTox-Fluor™試薬を細胞に添加し、プレートシェーカー等で 1 分間、穏やか に撹拌する。 11. 37℃インキュベーターで 30 分間インキュベートする。 12. 蛍光測定：excitation 485nm/emission 520nm の条件で蛍光を測定する。 （その他の情報） ・ RealTime-Glo™は細胞の種類により、細胞数の測定範囲が異なります。 このため、RealTime-Glo™のマニュアルを参考に、あらかじめ予備実験を行い、測定でき る細胞数を決定してください。 ・ ステップ 1 で細胞を 100uL ずつ播種し、ステップ 2 の前に培地を 50uL 除去することも可 能です。 RealTime-Glo™ & CytoTox-Fluor™ multiplex assay INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS G9711, G9712, G9713, G9260, G9261 AND G9262 この Quick Protocol は TM431、TB350 を基に作成された簡易型のプロトコルです。 最新、詳細なプロコトルについては www.promega.com/protocols/をご覧ください。 Revised 04/15