RealTime-Glo™ & ONE-Glo™ multiplex assay

技術的なお問合せは： e-mail: prometec@jp.promega.com・Tel: 03-3669-7980・Fax: 03-3669-7982 www.promega.co.jp 1. 細胞培養表面処理済みの 96well 白クリアボトムプレートもしくはソリッドプレートに 任意の細胞数で 50μL ずつ播種する。 また、バックグラウンドとして、細胞を含まない培地だけの well も準備する。 2. 翌日、下記の表を参考に RealTime-Glo™とテスト化合物を含む培地を調製する。 Component volume x サンプル数 = 合計 培地, 2x テスト化合物 49.8 μL MT Cell Viability Substrate 0.1 μL NanoLuc® Enzyme 0.1 μL Final volume per sample 50 μL 3. 50μL の RealTime-Glo™試薬とテスト化合物を含む培地を細胞に添加する。 4. 37℃インキュベーターにて、10 分以上培養する。 5. 任意のタイムポイントにて、発光測定する （72 時間まで繰り返し測定可能）。 6. RealTime-Glo™の発光測定終了後、培養プレートを 37℃インキュベーターに戻してお く。 7. ONE-Glo™ Reagent の調製： ONE-Glo™ Luciferase Assay BufferとONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate を室温に 戻す。 ONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate のボトルに ONE-Glo™ Luciferase Assay Buffer を全量移す。 穏やかに転倒混和し、ONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate を溶かす。 8. 培養プレートをインキュベーターより取りだし、100μLのONE-Glo™ Reagentを各well に加える。 9. 室温にて、少なくとも 3 分間のインキュベーションを行い、細胞を溶解させる。 10. 発光シグナルを測定する。 （その他の情報） ・ RealTime-Glo™は細胞の種類により、細胞数の測定範囲が異なります。 このため、RealTime-Glo™のマニュアルを参考に、あらかじめ予備実験を行い、測定でき る細胞数を決定してください。 ・ ステップ 1 で細胞を 100uL ずつ播種し、ステップ 2 の前に培地を 50uL 除去することも可 能です。 RealTime-Glo™ & ONE-Glo™ multiplex assay INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS G9711, G9712, G9713, E6110, E6120 and E6130 この Quick Protocol は TM431、TM292 を基に作成された簡易型のプロトコルです。 最新、詳細なプロコトルについては www.promega.com/protocols/をご覧ください。 Revised 04/15