SV 96 Total RNA Isolation System

Revised 8/02 Part #9FB000J TECHNICAL INFORMATION: www.promega.co.jp • Tel 03-3669-7980 • Fax 03-3669-7982 SV 96 Total RNA Isolation System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS Z3500 AND Z3505. Quick PROTOCOL ライセート添加 RNAの補足 洗浄 洗浄 DNase処理 total RNA溶出 高純度 total RNA. Elution Plate Binding Plate Additional protocol information is available in Technical Bulletin #TB294, available upon request from Promega or online at www.promega.com サンプルの調製 1. 滅菌した1×PBSで細胞を1回洗浄。 2. 洗浄した細胞に100µlのSV RNA Lysis Buffer (+BME)を加え、ピペッテ ィングにより十分に撹拌。 RNA精製プロトコル 3. SV 96 Binding PlateをVacuum Manifold Baseの上に置き、吸引管を Manifold Baseのポートにつなぐ。 4. 細胞溶解液をSV 96 Binding Plateの各ウェルに移す。すべての細胞溶解 液がSV 96 Binding Plateのメンブランを透過まで吸引。 5. 500µlのSV RNA Wash Solution(+エタノール)をSV 96 Binding Plateの各 ウェルに加える。すべてのSV RNA Wash SolutionがSV 96 Binding Plate のメンブレンを透過まで吸引。 6. 1サンプルあたり以下のようにDNase Incubation Mixを調製する(この順 番で調製する)。 Solution Volume × Number of Prep = Total Yellow Core Buffer 20µl MnCl2 , 0.09M 2.5µl DNase I 2.5µl ピペッティングにより穏やかに混和; ボルテックスは不可 7. 25µlのDNase Incubation MixをSV 96 Binding Plateのメンブレンに直接 加え、20～25℃で10分間インキュベート。 8. 200µlのSV DNase Stop SolutionをSV 96 Binding Plateの各ウェルに加え、 すべてSV DNase Stop SolutionがSV 96 Binding Plateのメンブランを透過 するまで吸引。 9. 500µlのSV RNA Wash SolutionをSV 96 Binding Plateの各ウェルに加え、 すべてSV DNase Stop SolutionがSV 96 Binding Plateのメンブランを透 過するまで吸引。ウェルが空になってから、さらに10分間の吸引を行 う。 10.吸引管をManifold BaseからManifold Collarに繋ぎ換える。Manifold BaseからSV 96 Binding Plateを外し、キムタオルの上に残ったエタ ノールをきる。 11.Elution PlateをManifold Bedの上に置き、さらにManifold Collarを置 く。 12.SV 96 Binding Plateを置き、100µlのNuclease-Free waterをBinding Plateの各ウェルに加える。1分間インキュベートし、1分間吸引す る。 2626MB03_1A Manifold Base Manifold Base Binding Plate A. Total RNA Binding Apparatus B. Washing Apparatus C. Elution Apparatus Binding Plate Vacuum Port with Insert in place Manifold Bed Manifold Collar Binding Plate Elution Plate