Wizard® SV 96 Genomic DNA Purification System

Revised 2/02 Part #9FB070J TECHNICAL INFORMATION: www.promega.co.jp • Tel 03-3669-7980 • Fax 03-3669-7982 Wizard® SV 96 Genomic DNA Purification System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A2370 AND A2371. Quick PROTOCOL

 ライセート添加 DNA結合 洗浄 ゲノムDNA溶出 高純度ゲノムDNA Additional protocol information is available in Technical Bulletin #TB303, available upon request from Promega or online at www.promega.com マウス尾断片、動物組織、培養細胞からのゲノムDNA精製 マウス尾断片、組織サンプルの調製 1. マウス尾を 0.5～1.2cm の長さに切断、または組織サンプル＜20mg を 秤量。マウス尾または組織サンプルをさらに2つに切断し、96ウェルデ ィープウェルプレートに入れる（キットには含まれません）。 2. Digestion Solution Master Mix 275µl を各サンプルに添加。サンプルが 溶液に覆われていることを確認。粘着シールでプレートをカバー。 3. プレートを一晩 (16～18 時間) 55℃ 恒温槽でインキュベート。水がプレ ート上にこないことを確認。攪拌しない。 4. インキュベート後、Wizard® SV Lysis Buffer 250µl を各ウェルに添加。 ライセートは操作中、温める。サンプルをピペッティングで混和。 マウス尾断片、組織サンプルからのゲノムDNA精製 5. Manifold Base上にBinding Plateを置き、Manifold Baseの吸引ポートに 吸引ホースを取り付ける（右図参照）。 6. ライセートをBinding Plateの各ウェルに添加。ライセートが Binding Plate を通過するまで吸引。 7. Wizard® SV Wash Solution (95% エタノール添加済み) 1ml を各ウェル に添加。 8. Wash SolutionがBinding Plateを通過するまで吸引。ステップ 7-8 の洗 浄操作を計3回繰り返す。 9. ウェルが空になった後、さらに6分間吸引を続け、をメンブレンを乾燥。 10. 吸引を停止後、Manifold Baseから吸引ホースを外し、Vacuum Manifold Collarの吸引ポートに繋ぎ換える（音がするまで）。Binding Plateを外し、静かに紙で余分なエタノールを吸い取る。 11. 96ウェルディープウェルプレートを Manifold Bedに置き、Vacuum Manifold Collar をその上に置く。数字の表示されたカラムヘッダーを吸 引ポート側に向ける。 12. Binding PlateをManifold Collarの上に置く（右図参照）。 13. Binding Plateの各ウェルにNuclease-Free Water 250 µl を添加し、2分 間、室温でインキュベート。 14. Nuclease-Free Water がBinding Plateを通過するまで吸引。 15. ステップ13-14 を再度繰り返す（総溶出液量 約 500µl ）。 16. 吸引を停止し、Binding Plateを取り外す。Manifold Collarを外し、ディ ープウェルプレートが Manifold Bed上にあることを確認。飛沫がウェ ルの上部にある場合は、プレートを静かにタッピングする。 溶出液量 は若干の差はありますが、通常 400～450 µlです。プレートは、plate sealerできつくカバーし、サンプルは-20℃または- 70℃で保存。 培養細胞からのゲノムDNA精製 1. 細胞を、滅菌した1X PBSで洗浄 2. 洗浄した細胞にWizard® SV Lysis Buffer 150µl を添加し、ピペッティン グにより混和。 3. Manifold Base上にBinding Plateを置き、Manifold Baseの吸引ポートに 吸引ホースを取り付ける（右図参照）。 4. ライセートをBinding Plateの各ウェルに添加。ライセートが Binding Plate を通過するまで吸引。 5. Wizard® SV Wash Solution (95% エタノール添加済み) 1ml を各ウェルに 添加。 6. Wash SolutionがBinding Plateを通過するまで吸引。ステップ 5-6 の洗 浄操作を計3回繰り返す。 7. ウェルが空になった後、さらに6分間吸引を続け、をメンブレンを乾燥。 8. 吸引を停止後、Manifold Baseから吸引ホースを外し、Vacuum Manifold Collarの吸引ポートに繋ぎ換える（音がするまで）。Binding Plateを外し、静かに紙で余分なエタノールを吸い取る。 9. 96ウェルディープウェルプレートを Manifold Bedに置き、Vacuum Manifold Collar をその上に置く。数字の表示されたカラムヘッダーを吸 引ポート側に向ける。 10. Binding PlateをManifold Collarの上に置く（右図参照）。 11. Binding Plateの各ウェルにNuclease-Free Water 250 µl を添加し、2分 間、室温でインキュベート。 12. 1分間吸引。 13. 吸引を停止し、Binding Plateを取り外す。Manifold Collarを外し、ディ ープウェルプレートが Manifold Bed上にあることを確認。飛沫がウェ ルの上部にある場合は、プレートを静かにタッピングする。 溶出液量 は若干の差はありますが、通常 約225 µlです。プレートは、plate sealerできつくカバーし、サンプルは-20℃または- 70℃で保存。 Digestion Solution Master Mix Volume per Sample Nuclei Lysis Buffer 200µl 0.5M EDTA (pH 8.0) 50µl proteinase K, 20mg/ml 20µl RNase A Solution, 4mg/ml 5µl Total Volume 275µl 2626MB03_1A Manifold Base Manifold Base Manifold Bed Manifold Collar Binding Plate Binding Plate A. Genomic DNA Binding Apparatus B. Washing Apparatus C. Elution Apparatus Binding Plate Vacuum Port with Insert in place Elution Plate