Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System

Revised 2/08 Part #9FB000J TECHNICAL INFORMATION: www.promega.co.jp • Tel 03-3669-7980 • Fax 03-3669-7982 Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCTS A9280, A9281 AND A9282. 吸引法� DNA結合� 遠心による洗浄� および溶液の除去� spin columnを1.5ml 遠心チューブに移し遠心 ゲル-スライス� からの精製 PCR反応からの� ダイレクト精製 加温によるゲル溶解� (50-65℃) Membrane Binding Solution 添加� Membrane Binding Solution 添加� minicolumnに分注� DNAフラグメントの溶出� Miniprep Vacuum Adapter ( カタログ番号 A1331) VacMan® Laboratory Vacuum Manifold ( カタログ番号 A7231) 吸引による洗浄� および溶液の除去� 遠心法� Additional protocol information is available in Technical Bulletin #TB308, available upon request from Promega or online at www.promega.com サンプル調製 ゲルスライスの溶解（ゲルからのDNA断片精製の場合） 1. 標準的または低融点アガロースゲル（TAEまたはTBEバッファー使用） を用いた電気泳動。 2. 清潔なカミソリやメスで目的のバンドを切り取り、1.5ml 遠心チューブ に入れる。 3. Membrane Binding Solution をゲルスライス10mgに対して10µl 添加し、 ボルテックス（5kb以上のフラグメントの場合は転倒混和により混合）。 4. 50-65℃で10分間またはゲルスライスが完全に溶解するまでインキュベ ート。 PCR産物（PCR反応からのDNA断片精製の場合） 1. PCR反応液に等量のMembrane Binding Solution を添加。 遠心法プロトコル 1. Collection TubeにSV Minicolumnを挿入し、調製したゲル溶解液または PCR産物を添加後、室温で1分間インキュベート。 2. SV Minicolumn assemblyを16,000 × g、1分間遠心した後、SV Minicolumn を取り外し、Collection Tube内の液体を除去。SV Minicolumn は、Collection Tubeに再度挿入。 3. Membrane Wash Solution (95% エタノール添加済み) 700µl を添加 し、SV Minicolumn assemblyを16,000 × g、1分間遠心。Collection Tubeの中の液体を除去。 4. Membrane Wash Solution (95% エタノール添加済み) 500µl を再度 添加し、16,000 × g、5分間遠心。columunが濡れている場合、1分間の 遠心操作を加える。 5. SV Minicolumn を新しい1.5ml 遠心チューブに移し、Nuclease-Free Water 50 µl を添加。 6. 1分間、室温でインキュベートした後、16,000 × g、1分間遠心。 7. SV Minicolumnを廃棄し、遠心チューブ内の溶出されたDNAは、4℃ま たは-20℃で保存。 吸引法プロトコル 1. マニホールド上のポートに取り付けたLuer-Lock® に Vacuum Adapterを 装着。SV MinicolumnをVacuum Adapterに挿入。 2. 調製したゲル溶解液またはPCR産物をSV Minicolumnに移し、室温で1 分間インキュベート。溶液がSV Minicolumnを完全に通過するまで吸引。 3. Membrane Wash Solution (95% エタノール添加済み) 700µl をSV Minicolumnに添加し、液体がSV Minicolumnを通過するまで吸引。 4. Membrane Wash Solution (95% エタノール添加済み) 500µl を再度 添加し、ステップ3と同様に洗浄。 5. 吸引源を止め、マニホールドの未使用ポートを開けて陰圧を開放。 6. SV Minicolumnをマニホールドから外し、Collection Tubeに移す。この SV Minicolumn assemblyを16,000 × g、5分間遠心し、columnに残って いるMembrane Wash Solutionを除去。 7. SV Minicolumnを1.5ml遠心チューブに移し、Nuclease-Free Water 50 µl を添加。室温で1分間インキュベートした後、16,000 × g、1分間遠心。 8. SV Minicolumnを廃棄し、遠心チューブ内の溶出されたDNAは、4℃ま たは-20℃で保存。 Quick PROTOCOL