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P450-Glo™ Assay System

生細胞またはミクロソーム画分を使用したときに、RLU値が小さく、CYP450の活性が検出できなかったようです。どのようなことが原因として考えられますか？

原因としては、以下のことが考えられます。

①サンプルのCYP450活性が低い。
→Positive Controlとして、必ずCYP450精製酵素とルシフェラーゼの発光量の相関性を確認してください。ルミノメーターの感度もご確認ください。 HepG2　Cells（ヒト肝臓由来の細胞株）などの株化された培養細胞を使用した場合、CYP450が低レベルもしくは全く発現しないため、測定できない可能性があります。

②インキュベーション時間が短い。
→肝細胞やミクロソーム画分をサンプルとして測定する場合は、P450-Glo™ Luciferin SubstrateとCYP450の反応時間を長く（2～4時間）してください。

③サンプルとして用いる細胞数やミクロソーム画分量が少ない。
→1回のアッセイに使用する細胞数は、50,000～100,000 cells、ミクロソーム画分量は、20μgです。