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Flexi® Vector System

Flexi® Vector Systemは基本的にSgf IおよびPme Iを利用したdirectional cloning systemのようですが、Sgf IおよびEcoICRIサイトを利用するC-terminal Flexi® VectorでEntry cloneを作製してもいいですか？

C末端タグコンストラクトのみ必要で、将来的にもN末端タグ、あるいはタグなしのFlexi^® Vectorにクローニングすることはないということでしたら、C-terminal Flexi^® VectorでEntry cloneを作製してもいいかもしれません。ただし、Pme IおよびEcoICRIサイトを用いたC-terminal Flexi^® Vectorは、Pme Iサイトのようにstop codonを導入しない目的でEcoICRIサイトを採用しています。そのため、Pme I－EcoICRI断片をN末端タグ、あるいはタグなしのFlexi^® Vectorにクローニングするとstop codonが導入されませんので、本来のORFで翻訳をstopすることができません。従いましてプロメガでは、マニュアル、およびFlexi^® Vector Primer Design Toolでは、「Entry」の方法としてSgf I－Pme Iを利用したFlexi^® Vectorへのクローニング方法のみご紹介しております。「こちら」に簡単な説明図がございますのでご参照ください。