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RT-PCR　基本情報

逆転写反応にはどんな酵素が使えますか。

以下逆転写酵素がお使いいただけます。
・AMV (Avian Myeloblastosis Virus) (Cat.# M5101, M5108, M9004)
・M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) (Cat.# M1701, M1705)
・M-MLV, RNase (H–), Point Mutant (Cat.# M3681, M3682, M3683)
・M-MLV, RNase (H–) (Cat.# M5301)
・GoScript Reverse Transcriptase (Cat.# A5003, A5004)

【酵素分子】 M-MLV RTは71 kDaの単量体タンパク質です(1)。AMV RTは63 kDaのαサブユニットと92 kDa のβサブユニットからなる155 kDaの二量体です(2)。GoScriptはM-MLV ベースです。

【RNase H活性】 M-MLV RTはAMV RTよりも低い RNase H 活性を示します(3)。このため、M-MLV RTはより長い cDNA (>5kb) の逆転写に適しています。プロメガではRMase H活性を消失させた変異体も取り扱いしております。

【反応温度】 AMV RT は M-MLV RT に比べて非常に高い processivity (一度結合した時に取り込まれるヌクレオチドの数) を示し、さらにより高い反応温度で活性を示します。一般的に、M-MLV RT は 37℃ で使われます。AMV RT は 2 ステップのRT-PCR では通常 42℃ で使われますが、58℃ まで活性が維持されます。このように AMV RT は高温で活性を維持しているため、強固な２次構造を持ったRNAからの逆転写反応に適しています。GoScript Reverse Transcriptaseは最新のバッファー技術を採用しており、阻害剤の存在下でも希少なものから豊富なものまで、幅広いレンジの転写物をcDNAに合成できるようにデザインされています。

【逆転写酵素　性能比較表】

参考文献：

1. (1) Roth, M.J., Tanese, N. and Goff, S.P. (1985) J. Biol. Chem. 260, 9326.
2. (2) Grandgenett, D.P., Gerard, G.F. and Green, M. (1973) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70, 230.
3. (3) Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989) In: Molecular Cloning, A Laboratory Manual Vol. 1, Second Edition, 5.52.