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M-MLV Reverse Transcriptase, RNase H Minus

どのようにしたら逆転写酵素からRNase H活性を除去できるのですか。

逆転写酵素のDNAポリメラーゼ活性は、付随するRNase H活性には依存しません。すなわち、cDNA合成におけるRNase H活性の悪影響はRNase H活性を持たない逆転写酵素を作製するすることで除去できます。これは、そのタンパク質のRNase H活性領域に変異を導入することによって達成されます。これらの逆転写酵素はRNase H (-)と呼ばれます。RNase H活性の除去により、プライマーとRNAのハイブリッドが分解されないため、逆転写反応がより効率的に開始されるようになります。また、前述のように合成の早期終結が起こりにくいため、完全長cDNAの合成もより効率が上がります。(PN75-Q&A)