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P450-Glo™ Assay System

P450-Glo™ Assayとはどのような製品ですか？

P450-Glo™ Assayは、シトクロムP450（以下CYP450と略します）に対する阻害剤や相互作用する化合物をスクリーニングする目的で開発された製品です。
CYP450精製酵素と任意の化合物を用意し、Luciferin誘導体であるP450-Glo™ Luciferin Substrate （表1参照）と反応を行います（Step1）。ここで反応が起こると、 P450-Glo™ Luciferin Substrateは代謝されてルシフェラーゼの基質であるLuciferinになります。

次に、Luciferin Detection Reagent（システム付属品）を加えて、ルシフェラーゼ反応を行い、ルミノメーターでその発光量（RLU値）を測定します（Step2）注）。

Step1, 2の概略図はこちら。

CYP450の活性が高いと、RLU値は高くなります。逆にCYP450の活性が低いと、RLU値は低くなります。

以下にP450-Glo™ Luciferin Substrateとそれに対応するCYP450の分子種の表を示します。

表1　P450-Glo™ Assayで使用するP450-Glo™ Luciferin Substrateと
それに対応するCYP450分子種

P450-Glo™　Luciferin　Substrate	CYP450分子種※1	アッセイタイプ
Luciferin-ME	1A2, 2C8, 2C9, 2J2, 4A11, 4F3B, 19	酵素
Luciferin-1A2※3	1A2	酵素、生細胞※2
Luciferin-CEE	1A1, 1B1, 3A7	酵素、生細胞※2
Luciferin-2B6※3	2B6	酵素、生細胞※2
Luciferin-H	2C9	酵素、生細胞※2
Luciferin-ME EGE	2D6, 1A1, 1A2, 2B6※5	酵素
Luciferin-H EGE	2C19, 1A1, 1A2	酵素
Luciferin-BE※4	3A4, 3A5, 3A7, 4F12	酵素
Luciferin-PFBE※4	3A4, 3A5, 3A7	酵素、生細胞※2
Luciferin-PPXE※4	3A4, 3A5, 3A7	酵素
Luciferin-IPA※4	3A4	酵素、生細胞※2

注）測定は、ルミノメーター（発光測定装置）を使用します。
※1 太字名のキット群に、該当Luciferin基質が含まれている製品があります。
※2 生細胞でのアッセイについてはこちらをご参照ください。
※3 CYP1A2/Luciferin-1A2およびCYP2B6/Luciferin-2B6の代謝産物はルシフェリン前駆体です。Luciferin Detection Reagent中のD-Cysteineとの反応によりD-luciferinが生成します。
※4 Luciferin-BE、Luciferin-PFBE、Luciferin-PPXE、Luciferin-IPAの使い分けに関しては、こちらをご参照ください。
※5 反応系にcytochrome b5がある場合、CYP2B6活性は検出できません。