Caspase-Glo® Assay(発光検出)

組織サンプルを用いてCaspaseを測定することはできますか?

プロメガでは、Caspase-Glo™を用いて組織に存在するCaspase活性は確認しておりません。ただし、文献(1)でマウスの肝臓をホモジネートしたのち、Caspase-Glo™を用いてCaspase-3/7, 8, 9を測定した報告例があります。この論文の手順は以下のとおりになります。

1) マウスの組織を低浸透性buffer(25 mM HEPES, pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 1 mM Pefablock, 1 μg/mL, pepstatin, leupeptin, aprotinin)でホモジネートする
2) 13,000rpm、4 ℃、15分間遠心
3) タンパク濃度を1mg/mLとなるように調整する
4) 10μg/mLの細胞質タンパクと同じ容量のCaspase-Glo™試薬を96 well plateに加え、室温で1時間インキュベート
5) ルミノメーターで発光値を測定

参考文献(1):
Liu, D, Li, C, Chen, Y, Burnett, C, Liu, XY, Downs, S, Collins, RD, and Hawiger, J.Nuclear Import of Proinflammatory Transcription Factors Is Required for Massive Liver Apoptosis Induced by Bacterial Lipopolysaccharide. Journal of Biological Chemistry 279, (46) pp. 48434-48442, 2004

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