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pGEM®-T Vector Systems ・ pGEM®-T Easy Vector Systems

pGEM®-T Vector、pGEM®-T Easy Vector、pTARGET™ Mammalian Expression VectorのようなT-Vectorへのクローニングに適した耐熱性酵素はどれですか？

3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を欠いた耐熱性DNA Polymerase(例えばTaq, Tfl, Tth DNA Polymerase)はpGEM^®-T VectorやpGEM^®-T Easy VectorのようなT-vectorに適用できます。Tli, Pwo, Pfuのようなプルーフリーディング機能をもった耐熱性DNA Polymeraseでは、3’→5’エキソヌクレアーゼ活性を有しているのでT-vectorに適用できませんが、増幅後にTaq DNA Polymerase(または類似の酵素)とdATPを使って末端にAを付加することで適用できます(1)。このように、すべてのPCR産物はT-vectorにクローニングすることができます。ただし、プルーフリーディング機能を有するポリメラーゼでは上記のような末端付加反応が必要です。（PN67-FAQ)

参考文献 :

1. pGEM^®-T and pGEM^®-T Easy Vector Systems Technical Manual #TM042, Promega Corporation.