Ribo m7G Cap Analog
- 標準反応にRibo m7G Cap Analogを加えることで収量は減少しますか?
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cap analogの取り込みによってRNAの収量は標準反応に対して20～50%減少します。14kb以上を目的としたin vitro転写反応では、低い比率で転写されたり、予想よりも小さなサイズの転写産物が得られます。これはrGTPが不足しているためと考えられます。このためプロメガではrGTPの濃度を上げるように推奨しています。転写反応の効率とcap付加された転写産物の生成量の釣り合いをとるために、cap analog:rGTPの比率を10:1から1:1の範囲で変動させることができます。伸長を促進するために反応温度を30℃まで下げることができますが、この処置は転写産物の生成量には無関係です。
予想よりも転写産物が短い場合、転写開始が制限されています(律速段階である可能性があります)。このような時には、インキュベーション時間を延長する、RNA polymeraseの量を増やす、鋳型の濃度を上げるなどの対処を行ってください。(PN74-Q&A)
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