Kinase-Glo®
- Kinase-Glo® で測定できるキナーゼにはどのようなものがありますか？
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Kinase-Glo® はキナーゼ反応後の反応溶液中のATP量を測定しますので、どのタイプのキナーゼにも使用できます。弊社で実施したキナーゼの反応条件を表1に示します。
表1 キナーゼの反応条件
Kinase Substrate ATP Reaction Buffer Kinase Rxn
Time/Temp.EC50 PKA
(V5161)Kemptide (V5601) 5μM 1μM 40mM Tris [pH 7.5], 20mM MgCl2, 0.1mg/mL BSA 20min., room temp. 0.15 units/well PKC
(V5261)Neurogranin (28-43) (V5611) 10μM 1μM 20mM Tris [pH 7.5], 10mM MgCl2, 0.1mg/mL BSA, 250uM EGTA, 400uM CaCl2, 0.32mg/mL phosphatidylserine, 0.032mg/mL diacylglycerol 90min., room temp. 7.9ng/well Lck
(Upstate, #14-442)PTK peptide 2 substrate (V288A) 250μM 3μM 8mM imidazole hydrochloride [pH 7.3], 8mM beta-glycerophosphate, 200uM EGTA, 20mM MgCl2, 1mM MnCl2, 0.1mg/mL BSA 60min., room temp. 4.3 m units/well Erk-2 66μM MBP (bovine myelin basic protein, Upstate, #13-104) 100nM 40mM Tris-HCl [pH 7.5], 0.1 mg/mL BSA, 20mM MgCl2 120min., room temp. 49ng/well PI 3-kinase (pp110Y) 0.5mg/ml L-α-phosphatidylinositol (Sigma # P8443) 500nM 10mM Tris-HCl [pH 7.5], 50mM NaCl, 5mM MgCl2 90min., room temp. 70ng/well
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