• Q&Aトップ
• レポーターアッセイ＆シグナリング
• 細胞内シグナリング_キナーゼアッセイ
• Kinase-Glo®

Kinase-Glo®

384 well plateを使用したHigh Throughput Screeningは可能ですか？

可能です。プロメガの技術資料として、LV (low volume) 384well plate, 1536 well plateを用いたキナーゼ阻害剤のスクリーニングを実施した例があります。96 well plateの一般的な反応組成の比較は、表2をご参照ください。

表2　LV384 well plateと1536 well plateを使用したときの反応組成およびアッセイ操作方法

	96 well	LV384 well			1536 well
反応組成 (total volume)	100 μL	10 μL	6 μL	3 μL	8μL	5μL	2μL
1. テスト化合物	5.0 μL	500 nL	300 nL	150 nL	400 nL	250 nL	100 nL
2. PKA	20 μL	2 μL	1.2 μL	600 nL	1.6 μL	1.0 μL	400 nL
3. Kemptide Substrate	25 μL	2.5 μL	1.5 μL	2.0 μL	750 nL	1.25 μL	500 nL
4. 20分間室温でインキュベート
5. Kinase-Glo® 試薬を添加	50 μL	5.0 μL	3.0 μL	1.5μL	4.0 μL	2.5 μL	1.0 μL
6. 20分間室温でインキュベート
7. 発光量を測定