HaloTag®Ligand

プロトコールではリガンド標識のためのインキュベーション時間を15分間に設定していますが、短くすることは可能ですか?

アッセイに使用する細胞によっても変化しますので、基本的にはプロトコールの記載に従ってください。

(参考)TMRはFAMに比べてHaloTag®タンパク質との結合速度が約10倍速いことがわかっています。プロトコールでの15分はTMR, FAMともに十分に反応できる時間として設定していますので、TMRの場合は短縮することは可能です。FAMの場合はdiAcFAMとして添加しますが、血清成分によりFAMに変換されると細胞内への取り込み速度が著しく低下します。従って、diAcFAMを使用する場合はインキュベーション時間の短縮は推奨いたしません。

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