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Single Step (KRX) Competent Cells

KRXでタンパク質発現を行う方法を簡単に教えてください

次のような手順で行います。

1. 得られたクローンを適切な抗生物質を含むLB培地を用いて、37℃で一晩振とう培養（275rpm）する。（前培養）
2. 前培養液を適切な抗生物質を含むLB あるいは Terrific 培地で1:100 に希釈する。37℃で振とう培養（275rpm）する。 LB 培地でO.D.₆₀₀　が 0.4～0.5　あるいは　Terrific 培地でO.D.₆₀₀　が 0.8～1.0まで培養する。
3. 培養温度15～25℃のインキュベーターに移して、引き続き振とう培養（275rpm）する。
4. LB 培地でO.D.₆₀₀　が 0.5～0.6　あるいは　Terrific 培地でO.D.₆₀₀　が 1.0～1.5に到達したら、終濃度0.1％になるようにラムノースを添加する。(20% ラムノースを200倍希釈). pET Vectors (Novagen) やプロメガのFlexi® Vectors のようにlac オペレーターが含まれる場合には、IPTG (終濃度1mM )を添加することで、より高いタンパク質発現が得られるかもしれません。
5. 培養温度15～25℃で一晩培養する。
6. 集菌する。
7. ライセートを調製する。

詳しくは製品プロトコール（TB352）をご参照ください。