MagneGST™ Protein Purification System ・ MagneGST™ Pull-Down System
- MagneGST™ Pull-Down Systemを用いてprey タンパク質を捕捉したときに、高いバックグランドが認められました。このバックグランドを除く方法を教えてください。
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GST-コントロールを用いた場合でも同じようなバックグランドが認められた場合、非特異的な相互作用が起きていると考えられます。このバックグランドを最小化するために、以下の点を検討してください。
- MagneGST™ Binding/Wash Bufferに塩や界面活性剤を添加することにより、特異性を高めてください。
- 洗浄回数を増やしてください。
- タンパク質-タンパク質間相互作用を行う際に、終濃度が1%までとなるようにBSAを添加してください。IGEPAL-CA630(NP-40アナログ)は、終濃度0.5%となるように添加したときでも、バックグランドが減少します。
<参考>
MagneGST™ Glutathione Particlesを多く使用すると、強いバックグランドが生じます。MagneGST™ Pull-Down Systemでは、5µlのMagneGST™ Glutathione Particlesを用いたときに、最もよい結果が得られます。
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