ADP-Glo

ADP濃度とRLU値の相関性を調べるためにはどうすればよいですか？

キットに添付されているATPとADPスタンダードを使用して標準曲線を作成し、ADP量と発光値の関係を調べることができます。ADPのみの標準曲線を作成するのではなく、反応中のATPの何%がADPに変換されたかを調べるためにATPとADPの比率を変えて混合したサンプルで標準曲線を作成します。
例として、1mM ATP-ADP変換曲線の作成方法を示します。キットに添付されているUltra Pure ATP, 10mMとADP, 10mMをKinase Reaction Buffer (実際にキナーゼ反応に使用するもの)で希釈し、表1のように各濃度のATP/ADP混合液を調製します。各濃度のATP/ADP混合液25µlにADP-Glo™ Reagentを25µlずつ加えて40分インキュベートします。その後Kinase Detection Reagentを50µlずつ加え、40分インキュベートしたのち、ルミノメーターで発光を測定して下さい。

% ATP1008060402010543210
1mM ADP (µl)1008060402010543210
1mM ATP (µl)020406080909596979899100
% ADP020406080909596979899100

表1　ATP-ADP変換曲線のサンプル調製

図3　 1mM ATP-ADP変換曲線

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