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TNT® System

TNT® System のうち、RRLとWGEのどちらを選択すればよいですか？

合成したいタンパク質の由来、鋳型DNAの形態（環状DNAまたは直鎖DNA）と鋳型DNAに含まれるプロモーター配列 (T7, SP6, T3) から最適なTNT^® Systemを決定してください（表1～表3）。

表1 in vitro 翻訳システムの鋳型の由来による選択ガイド

表2　アプリケーションによるin vitro タンパク質翻訳システム選択ガイド

表3　TNT Systemと鋳型DNA、プロモーターの組み合わせ

TNT® System 製品名	ライ セート	鋳型DNA	マスタ ーミッ クス*	コント ロール DNA	プロモーター
TNT® T7 Quick for PCR DNA	RRL	環状DNA (可能) 直鎖DNA (推奨)	○	不含	T7 Promoter
TNT® Quick Coupled Transcription / Translation System	RRL	環状DNA (推奨) 直鎖DNA (可能)	○	不含	T7 Promoter SP6 Promoter
TNT® Coupled Rabbit Reticulocyte Lysate System	RRL	環状DNA (推奨) 直鎖DNA (可能)	×	含	T7 Promoter T3 Promoter SP6 Promoter
TNT® Coupled Wheat Germ Extract System	WGE	環状DNA (許容) 直鎖DNA (許容)	×	含	T7 Promoter T3 Promoter SP6 Promoter

*:マスターミックスとは、RRLと反応Buffer、アミノ酸Mixture (minus メチオニン)の混合溶液になっているため、試薬調製の際に各反応組成溶液を分注するステップが簡略化できます。

一般的には、哺乳類由来のタンパク質発現を目的とした場合に、RRLを使用し、植物由来のタンパク質合成などには、WGEを使用します。膜タンパク質の合成、翻訳後修飾（糖鎖付加、リン酸化など）必要とする発現系については、RRLが研究報告などから有効と考えられています。

ただし、以下に示す鋳型DNAとプロモーター、TNT^® Systemの組み合わせは避けてください。

1) 直鎖DNA、 SP6 promoter、RRL またはWGE

2) 環状DNA 、T7 promoter、 WGE